lucy-1.20p/0000755000245300000770000000000011057553526011776 5ustar mholmestigrlucy-1.20p/ARMTM40TR.qul0000644000245300000770000000566507227110046014015 0ustar mholmestigr>ARMTM40TR 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 19 00 00 00 00 00 00 15 15 17 00 00 00 00 00 00 00 16 21 25 28 21 17 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 15 00 00 00 00 17 23 24 24 24 24 20 20 33 33 33 33 33 33 33 33 33 40 40 36 36 36 33 33 33 33 33 33 37 37 35 35 35 35 36 36 36 36 37 42 40 40 33 33 33 33 33 35 37 40 40 45 40 40 36 36 36 36 38 38 49 49 43 43 33 33 33 33 33 33 42 37 37 37 45 40 41 37 45 37 37 37 34 34 42 35 35 34 34 34 34 40 40 40 49 49 45 33 33 33 33 33 33 41 45 45 45 45 45 45 45 49 49 49 49 49 45 45 45 45 45 45 41 41 41 45 41 37 37 37 37 40 40 40 42 37 41 51 45 45 49 45 45 45 45 45 45 45 45 45 51 51 51 51 51 51 51 51 51 45 45 45 49 49 40 39 42 40 39 39 39 41 41 39 39 39 39 39 39 45 51 51 51 51 51 45 45 41 41 41 51 51 51 51 51 51 51 45 45 45 40 40 40 45 45 43 51 43 45 45 43 43 51 51 51 45 41 41 41 51 51 51 51 51 39 39 39 39 39 40 45 41 41 51 51 51 45 45 51 51 45 45 45 45 45 45 45 51 51 51 51 51 51 51 51 51 41 41 41 41 41 45 51 51 51 51 51 45 45 45 45 40 40 49 49 49 45 51 51 51 41 41 41 41 43 45 45 45 37 37 37 41 39 39 40 40 39 45 45 45 45 51 45 41 37 36 30 30 30 34 38 40 40 49 51 51 51 51 51 51 39 39 40 40 39 38 38 42 42 42 37 37 45 51 51 51 51 51 51 51 51 51 51 51 51 51 51 51 45 40 40 40 37 37 37 45 45 45 49 49 45 45 45 45 45 45 37 37 45 37 37 37 45 45 45 45 45 45 45 45 45 45 40 40 42 35 35 35 34 37 37 40 40 37 37 41 41 41 44 45 45 45 45 37 31 31 31 31 34 34 37 41 41 31 31 28 32 32 34 35 35 35 35 32 32 24 32 32 37 34 34 34 34 34 34 34 34 34 35 38 34 34 34 38 37 37 37 37 37 29 29 27 34 27 33 30 33 33 33 40 45 49 45 38 35 27 24 24 32 32 32 32 26 29 28 32 00 00 00 00 00 00 18 29 34 34 29 31 23 18 00 00 18 23 31 34 33 28 30 30 30 24 31 34 34 32 32 26 26 29 31 25 26 00 00 00 25 32 36 32 19 00 00 00 00 00 20 23 31 30 25 24 24 29 30 30 24 18 16 00 00 00 25 25 25 00 00 00 20 18 15 00 00 00 00 00 18 17 25 15 00 00 00 00 17 15 00 00 00 17 00 00 00 32 32 29 29 20 25 00 00 00 20 15 25 20 20 20 18 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 16 18 15 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 17 20 25 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 15 00 00 00 00 00 00 00 16 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 15 15 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 lucy-1.20p/ARMTM40TR.seq0000644000245300000770000000175407227110047014000 0ustar mholmestigr>ARMTM40TR TTAGTCTGAAGNTGTTGAACCCAATATCGTTGCGACGCAGCGGTGGCGTGGGGTCGNTAA TATTAAATGATTAGAATCATAATTTTGAAAAAGACTCTTATAAATAAGAAATTATGGTCA TAAAAAATAAATCCCCCTACGACACCNCTGCTCTAATACGANTCACTATAAGGAAAGCTC GTACGCCTGCAGGCTTAGGATACGCCAAGCTCTAATACGACTCACTATAGGGAAAGCTGG TACGCCTGCAGGTACCGGTCCGGAATTCCCGGGTCGACCCACGCGTCCGGGCGCACGCCG GTAGGATCTGCCTCCCGAGCTCTGGGGTGAAATGTGTGTGCCACCTCTTCCATCCCCAAA TGGTGTTCTTTTAAGGCCAGAGGGTGTGTTGTCATATAGAAATCCCACATTCCAGGTCTG ATGTTTCCTCCTTTAGCCCACCGGCTTTCAAGGGCAATTTTATATTTTGTGCTGATGTGG CATTTCCCTCCTGCCTGTAGTGTGCCTCCTTCCACTGCCACCTGAAGGGAGGGCCGAACC AGCTTGGAGGAGGGGAAGGGGCTCCCCAAAGAAGCAGCATCACATTGGATAGGGGCTGAG GGCTCTGGGTGGGATGGCCTGCTGGACTGACCATGGCAGGCCAGCCAGGCTGGGCACTGA GTTGTCAGAATAATTGTGCACAGCTTAGAGGAGCCGGGCTGCCCCATGCTAAGCATGGCA TCTGTCTTTCTCCATCTCTTTCCCTTTCTGTCTTTGTTTTGGTTTCCCTGCTTCTGTTCT GTGGGGTCTTCATTCTCTCGTTGGTCAATGTGCACTGGAGCAGAGACCAGACCTCAAGCT ATGACAGGGAGGGCTTTGACAGAAAAAGGCCCTCCTTTGGGCTGAGGTGTGAAAAGACTG GGTACAGGGGGTGGCCCACGGTAGTCTTCCTCCATAAAATGAGGGAGATGAAAGGTTTAA ATTGGGGTTTTCATCC lucy-1.20p/Copyright0000644000245300000770000000104210005752711013653 0ustar mholmestigrCopyright 1995-2004 The Institute for Genomic Research. All rights reserved. This software is provided "AS IS". The Institute for Genomic Research makes no representation or warranty, express or implied, including without limitation any warranties of merchantability or fitness for a particular purpose, associated with the receipt or use of this software. This software program may not be sold, leased, transferred, exported or otherwise disclosed to anyone, in whole or in part, without written consent of The Institute for Genomic Research. lucy-1.20p/HISTORY0000640000245300000770000004173511057553415013065 0ustar mholmestigrVersion 1.20, 9/3/2008. This version fixes a bug that caused lucy to fail when there was too much information on the FASTA header lines in the input files. Lucy had a 256 character buffer for reading lines from the input files. If any FASTA header lines were longer than 256 characters, the remaining characters would get read as part of the FASTA sequence. The solution implemented in this version is simply to increase the buffer size to 4096 characters. While that still leaves the potential for the same error to occur with extremely long header lines, the limitation that this entails seems reasonable, and this should fix the problem for all pratical purposes. --------------------------------------------------------------------- Version 1.19, 12/30/2003. This version fixes a bug that could cause sequences to be rejected incorrectly in the vector detection step (phase 6). Because of the way that lucy compares "tags" in the target sequence with "tags" in the vector sequence, some bases in the target sequence could get counted more than once in the tally of bases that match the vector sequence. In rare instances, this could cause the sequence to exceed the minimum threshold for rejection, as a result of random sequence similarity. The reporting of the CLB range in the -debug output file has also been changed. If the CLB range begins with the first base of the sequence, then the left coordinate of the CLB range will be reported as 1 (instead of 0). The range "CLB 0 0" still indicates an empty CLB range. --------------------------------------------------------------------- Version 1.18, 2/20/2003. This version fixes a bug that could cause lucy to crash. If the size of the largest sequence in the batch to be processed was less than the sum of the alignment ranges (200 by default), earlier versions of lucy could crash. The alignment ranges are controlled by the -range parameter. --------------------------------------------------------------------- Version 1.17, 8/29/02. There are 2 changes in this version. Lucy now allows up to 40 sequences in the splice file (up to 20 begin/end pairs). This is to allow for better trimming in complex situations, such as transposon systems. (40 sequences is overkill, I hope!) There is also an additional dynamic programming step added for splice site trimming at the 3' end of the sequence. The first trimming attempt at the 3' end uses the target sequence up to the end of the current clear range only. Normally this corresponds to the end of the good quality range. If that attempt does not find a hit, then a second attenpt is made using N bases before the end of the current clear range and N bases after, where N is the value of the third -alignment parameter (16 by default). The purpose of this additional step is to handle the case where the 3' splice site begins less than N bases from the end of the good quality range. --------------------------------------------------------------------- Version 1.16, 5/16/01. There is an obvious bug not in lucy but in the included utility program zapping.awk for physically trimming sequences after lucy processing. Apparently nobody uses it until now?! We do find a bug in lucy itself with regard to poly-A/T trimming. Previously, lucy attempts to trim poly-A at the beginning of an EST sequence and poly-T at the end of an EST sequence as well as the correct strategy, i.e., to find them at the opposite ends. This means that lucy attempts to find both poly-A/T at both ends, but it will choose only one poly-A or -T, but not both, at each end as the dominant target. Normally, if there is a strong poly-T signal at the beginning or a strong poly-A signal at the end of a sequence, this redundant checking won't cause a problem because it will still find the correct targets. However, this is not a biologically correct behavior anyway and may cause some innocent A's at the beginning of a sequence and some innocent T's at the end of a sequence to be trimmed away if there are no poly-T/A signals at either ends. This bug has now been corrected. Because lucy isn't used to trim EST sequences in our research environments often (we handle mostly genomic DNA), this bug wasn't found until some colleagues at Iowa State University tried to use lucy on their EST sequences and noticed this behavior. Also, at ISU scientists' request, we added a new feature to lucy, the -keep option. This option, when used in combination with the -cdna option, will preserve the poly-A/T tails/heads at ends of each EST sequence to keep them as tags indicating the direction of the EST sequence. Previously, lucy will trim poly-A/T away if given the -cdna option. The original design is for EST clustering purposes, where you don't want the poly-A/T to stay. However, if the researcher wants to see the EST sequence in its entirety to know its direction, it is not helpful to trim poly-A/T away. Therefore, now users can just give the -keep option to tell lucy to keep those poly-A/T tags but still remove anything else before and/or beyond them. Finally, there is a cosmetic bug-fix to remove the sequence count reporting redundancy during phase I of lucy processing. This does not effect the outcome of lucy before, but it won't hurt to fix it either. --------------------------------------------------------------------- Version 1.15, 10/29/00. Developed concurrently with version 1.14, this new version comes with multi-threading capability at the slowest step of lucy: phase 5 splice site trimming. Lucy can now take advantage of extra CPUs in a computer to speed up its processing. With two CPUs, lucy will run roughly two times faster than before. With four CPUs, lucy will take only a quarter of the runtime of the previous version. Because more affordable multiple CPU computers are becoming widely available, this multi-threading feature will be very useful for organizations that have lots of sequences to process. Functionally, this version is identical to version 1.14 and should produce exactly the same output. If you find any difference in the outputs between the two versions, please report that as a bug to us. --------------------------------------------------------------------- Version 1.14, 10/29/00. Previously in version 1.12 all splice site trimmings in lucy have been made adaptive to the beginning of the quality region so that there will be no chance of vector fragments in the good quality region, *but* it is possible to miss some vector fragments in the low quality region. The rationale is that anything in the low quality region will be tossed away anyway. However, after that modification lucy's output becomes somewhat different than before, particularly in its CLV summary report. The job to improve lucy further proves to be a very difficult one because lucy already has a very stable code base that strikes a delicate balance between various parameters. Although different outputs generated by version 1.12 should not be considered wrong, we cannot ascertain confidence with the new code even remotely comparable to our confidence on the original code base that has been in constant use and scrutiny at TIGR for over two years. Therefore, we decided to limit the scope of change and only include specialized codes to lucy that deal with occasional erroneous cases. In another word, we changed the strategy of the first attempt to find vector splice site fragments back to its original, fixed and non-adaptive design. To that effect, if you run the new version 1.14 of lucy over most data sets you may not see any difference in its output at all. However, when facing those rare cases where low quality values were much longer into the sequences, the vector splice site trimming should now be always correct and there should not be any missed vector splice sites in the good quality region lucy reports. A special test case was included in this release of lucy to illustrate the idea: If you run the following command with this version of lucy: lucy -v pSPORT1vector pSPORT1splice ARMTM40TR.seq ARMTM40TR.qul \ -debug ARMTM40TR.info You will find out that lucy reports vector splice site trimming position at 279. In previous versions of lucy (you can try), the vector splice site would be missed because of a much longer than expected low quality region in this sequence (up to 211bp!). However, if you run lucy with the standard test command shown in the README.FIRST file: lucy -v PUC19 PUC19splice atie.seq atie.qul atie.2nd -debug lucy.info You should get exactly the same output as before, i.e., lucy's behavior was not dramatically changed compared to previous versions before 1.12. We opt for the final solution of letting lucy do an adaptive vector splice site trimming only in the the second (and rare) attempt. In summary, the new splice site trimming strategy in lucy is to do an "adaptive vector" trimming if the initial attempt to find vector splice sites in a fixed beginning region fails, of if the low quality region extends too much into the sequence. After quality assessment, lucy starts looking for vector splice sites in a fixed region at the beginning of a sequence. By default, that's the first 200 bases of a sequence no matter that region has been excluded off the "good quality" region lucy determines earlier or not. If that search fails, lucy will then look at the next 100 bases (201-300) for splice sites adaptive to the quality region lucy determines, i.e., it will look at the next 100 bp to the right of CLN reported in phase 3. For example, if CLN is 250 (which is rare, of course), then lucy will look for vector sites between 250 to 350 in the second attempt, instead of between 201 to 300. The reason for this change is that it is more important to prevent vector sequences in the good quality region than to actually find them. Of course, if CLN is 200 or less then lucy will still behave like before. Note that the trimming regions can be changed by users, thus if a user sets region 1, 2 and 3 to 50, 100, and 150 bases, then lucy will look for vector splice sites between 1 to 300 bp in the first attempt, then in the next 150 bp to the right of CLN or 300, whichever is further to the right. If you don't understand anything I said above, don't worry. Lucy will work for you as before with default parameters. These modifications were put into lucy to deal with special cases. Most of the sequence data will still be handled by lucy the same way and will get the same or better trimmings from lucy. After this latest modification, I have fixed all known bugs to date about lucy. Please let me know of any new bugs you find with lucy. --------------------------------------------------------------------- Version 1.13, 2/10/00. Michael Holmes at TIGR wrote a new quality assessment and trimming routine for lucy to replace the original grim.c algorithm which was designed to handle only ABI 377 outputs. This new quality trimmer is much more flexible and allows lucy to handle new phred and Paracel TraceTuner base caller outputs from the new ABI 3700 sequencer as well as the old ones. Some earlier version of phred produced non-zero quality values no smaller than 15. Previous versions of lucy will tend to over-trim sequences from those earlier versions of phred. Currently, we are using phred version 0.990722.g as our base caller for sequences from the ABI 377 sequencer, and TraceTuner (from Paracel) for sequences from the ABI 3700. We recommend that you use phred version 0.990722.g or later for 377 sequences. Note that this version was developed independently from version 1.11, so the changes in version 1.12 was not incorporated into it. However, in version 1.14 above, we merged all modifications together into a single code base again. Also, Michael now becomes a coauthor of lucy and will be maintaining the quality trimming code. --------------------------------------------------------------------- Version 1.12, 12/29/99. After over a year of practical use of lucy by many institutions, I have received several bug reports. Many of the bugs that were reported to me are actually not lucy's fault but due to incorrect/incomplete parametric data files users supplied to lucy. In another word, if lucy is given wrong vector splice files, you cannot expect it to be able to clean the vector fragments out of your sequences. My sincere words to users of lucy are that thank you for using lucy, and please read the document which comes with lucy before you put it to work for you. Two actual modifications are done to lucy in this new revision, one minor, the other, oh well, is also minor but can potentially remove the last known bug of incorrect vector trimming for sequences with quality cut-off extremely into the sequence, i.e., beyond position 200. The first modification is the relaxation of sequence name recognized by lucy. In the past, especially in TIGR, only numbers and letters are used for sequence names, thus lucy is built that way. After people other than TIGR started using lucy, I heard many complains that the underscore character '_' in sequence names was not recognized by lucy and therefore lucy thinks there are duplicative names in the sequences when there is none. I have now changed lucy to treat everything as part of sequence names except white spaces, return and the end of line characters. I hope this makes some of the users' life easier since now you don't have to rename your sequences just because you want to use lucy. The second improvement is that I now make lucy do an "adaptive vector" trimming rather than the fixed one in versions before this. In the past, after quality assessment, lucy starts looking for vector splice sites in a fixed region at the beginning of a sequence. By default, that's the first 200 bases of a sequence, no matter how bad the first 200 bases are and whether that region has been excluded in the "good quality" region lucy determines earlier. In this new version, I make that region adaptive to the quality region lucy determines, i.e., we make the vector trimming region centered around the CLN reported in phase 3. For example, if CLN is 250 (which is rare, of course), then lucy will look for vector sites between 150 to 350, assuming the default trimming region settings have not been changed. Note that the trimming regions can be changed by users, thus if a user sets region 1, 2 and 3 to 50, 100, 150 bases, then by the same example above lucy will look for vector sites between 100 to 400 on the sequence. That is, regions 1 and 2 are always on the left of the CLN and region 3 on the right of the CLN. Of course, if CLN is 150 or less than lucy will look at the first 300 bases, assuming the same user settings above. --------------------------------------------------------------------- Version 1.11, 12/17/98. Mike Holmes at TIGR found a special case where the false-positive preventive code is overdoing its job and prevents an otherwise perfect vector splice site match to be flagged and trimmed. It only happens when vector match site ends right after the 200 bp search range by default. This bug has been corrected. --------------------------------------------------------------------- Version 1.10, 11/25/98. By popular demands, a poly-A/T trimming feature has been added to lucy. Since this is a medium scale improvement that causes a new source code file poly.c to be created, I jump this version to 1.10 to reflect that difference. Check the manual page about the new option -cdna for this purpose. I am going home for Thanksgiving! :-) --------------------------------------------------------------------- Version 1.05, 10/14/98. Corrected a leftover CLB!=CLN+CLZ bug when a low quality sequence is salvaged. This bug does not show up for good sequences that have high quality values. --------------------------------------------------------------------- Version 1.04, 8/27/98. Corrected CL? reporting mechanism errors when sequences have no corresponding CL? data. --------------------------------------------------------------------- Version 1.03, 8/7/98. Added reporting option -inform so the user knows which low quality sequences are dropped and salvaged. --------------------------------------------------------------------- Version 1.02, 8/3/98. Added salvage effort for low quality sequences, so that even they are dropped at quality assessment phase, they can still be recycled if they match well to the ABI base calls. Note that if the ABI base calls have been wrongly selected as exactly the phred base calls, you will end up having some really nasty sequences included. Never provide a secondary (ABI) sequence which is exactly the phred sequence. --------------------------------------------------------------------- Version 1.01, 7/27/98. Added support for bidirectional vector trimming, multi-segment vector trimming, and corrected over-sensitive cases where a small fragment of false-positive vector causes an otherwise good sequence to be dropped. Other minor bugs fixed. --------------------------------------------------------------------- Version 1.00, 6/15/98. The first release version was done. Errors found during beta testing v.0.99 were corrected. --------------------------------------------------------------------- Version 0.99, 5/19/98. The first version of lucy was finished. I went on vacation. :) lucy-1.20p/Makefile0000644000245300000770000000034107532437456013442 0ustar mholmestigrCC = cc CFLAGS = -O LIBS = -lpthread OBJS = lucy.o qual_trim.o abi.o vector.o splice.o poly.o all: lucy beep lucy: $(OBJS) rm -f $@ $(CC) $(CFLAGS) -o $@ $(OBJS) $(LIBS) beep: @echo done! clean: rm -f $(OBJS) lucy lucy-1.20p/PUC190000644000245300000770000000537707227110051012520 0ustar mholmestigr>PUC19 pUC-JK BstXI Cloning Vector (high copy number plasmid derived from pUC19) tcgcgcgtttcggtgatgacggtgaaaacctctgacacatgcagctcccggagacggtca cagcttgtctgtaagcggatgccgggagcagacaagcccgtcagggcgcgtcagcgggtg ttggcgggtgtcggggctggcttaactatgcggcatcagagcagattgtactgagagtgc accatatgcggtgtgaaataccgcacagatgcgtaaggagaaaataccgcatcaggcgcc attcgccattcaggctgcgcaactgttgggaagggcgatcggtgcgggcctcttcgctat tacgccagctggcgaaagggggatgtgctgcaaggcgattaagttgggtaacgccagggt tttcccagtcacgacgttgtaaaacgacggccagtgaattcccaatgtgctgggtacccg ggatcctgcaggtcgaccagcacactggcaagcttggcgtaatcatggtcatagctgttt cctgtgtgaaattgttatccgctcacaattccacacaacatacgagccggaagcataaag tgtaaagcctggggtgcctaatgagtgagctaactcacattaattgcgttgcgctcactg cccgctttccagtcgggaaacctgtcgtgccagctgcattaatgaatcggccaacgcgcg gggagaggcggtttgcgtattgggcgctcttccgcttcctcgctcactgactcgctgcgc tcggtcgttcggctgcggcgagcggtatcagctcactcaaaggcggtaatacggttatcc acagaatcaggggataacgcaggaaagaacatgtgagcaaaaggccagcaaaaggccagg aaccgtaaaaaggccgcgttgctggcgtttttccataggctccgcccccctgacgagcat cacaaaaatcgacgctcaagtcagaggtggcgaaacccgacaggactataaagataccag gcgtttccccctggaagctccctcgtgcgctctcctgttccgaccctgccgcttaccgga tacctgtccgcctttctcccttcgggaagcgtggcgctttctcaatgctcacgctgtagg tatctcagttcggtgtaggtcgttcgctccaagctgggctgtgtgcacgaaccccccgtt cagcccgaccgctgcgccttatccggtaactatcgtcttgagtccaacccggtaagacac gacttatcgccactggcagcagccactggtaacaggattagcagagcgaggtatgtaggc ggtgctacagagttcttgaagtggtggcctaactacggctacactagaaggacagtattt ggtatctgcgctctgctgaagccagttaccttcggaaaaagagttggtagctcttgatcc ggcaaacaaaccaccgctggtagcggtggtttttttgtttgcaagcagcagattacgcgc agaaaaaaaggatctcaagaagatcctttgatcttttctacggggtctgacgctcagtgg aacgaaaactcacgttaagggattttggtcatgagattatcaaaaaggatcttcacctag atccttttaaattaaaaatgaagttttaaatcaatctaaagtatatatgagtaaacttgg tctgacagttaccaatgcttaatcagtgaggcacctatctcagcgatctgtctatttcgt tcatccatagttgcctgactccccgtcgtgtagataactacgatacgggagggcttacca tctggccccagtgctgcaatgataccgcgagacccacgctcaccggctccagatttatca gcaataaaccagccagccggaagggccgagcgcagaagtggtcctgcaactttatccgcc tccatccagtctattaattgttgccgggaagctagagtaagtagttcgccagttaatagt ttgcgcaacgttgttgccattgctacaggcatcgtggtgtcacgctcgtcgtttggtatg gcttcattcagctccggttcccaacgatcaaggcgagttacatgatcccccatgttgtgc aaaaaagcggttagctccttcggtcctccgatcgttgtcagaagtaagttggccgcagtg ttatcactcatggttatggcagcactgcataattctcttactgtcatgccatccgtaaga tgcttttctgtgactggtgagtactcaaccaagtcattctgagaatagtgtatgcggcga ccgagttgctcttgcccggcgtcaatacgggataataccgcgccacatagcagaacttta aaagtgctcatcattggaaaacgttcttcggggcgaaaactctcaaggatcttaccgctg ttgagatccagttcgatgtaacccactcgtgcacccaactgatcttcagcatcttttact ttcaccagcgtttctgggtgagcaaaaacaggaaggcaaaatgccgcaaaaaagggaata agggcgacacggaaatgttgaatactcatactcttcctttttcaatattattgaagcatt tatcagggttattgtctcatgagcggatacatatttgaatgtatttagaaaaataaacaa ataggggttccgcgcacatttccccgaaaagtgccacctgacgtctaagaaaccattatt atcatgacattaacctataaaaataggcgtatcacgaggccctttcgtc lucy-1.20p/PUC19splice0000644000245300000770000000162407227110052013710 0ustar mholmestigr>PUC19.for.begin gcgtaaggagaaaataccgcatcaggcgccattcgccattcaggctgcgcaactgttgggaagggcgatc ggtgcgggcctcttcgctattacgccagctggcgaaagggggatgtgctgcaaggcgattaagttgggta acgccagggttttcccagtcacgacgttgtaaaacgacggccagtgaattcccaatgtgCTGGAAAGGG >PUC19.for.end CCCTTTCCAGCACActgggtacccgggatcctgcaggtcgaccagcacaCTGGcaagcttggcgtaatca tggtcatagctgtttcctgtgtgaaattgttatccgctcacaattccacacaacatacgagccggaagca taaagtgtaaagcctggggtgcctaatgagtgagctaactcacattaattgcgttgcgctcactgcccgc >PUC19.rev.begin gcgggcagtgagcgcaacgcaattaatgtgagttagctcactcattaggcaccccaggct ttacactttatgcttccggctcgtatgttgtgtggaattgtgagcggataacaatttcac acaggaaacagctatgaccatgattacgccaagcttgCCAGtgtgctggtcgacctgcag gatcccgggtacccagTGTGCTGGAAAGGG >PUC19.rev.end CCCTTTCCAGcacattgggaattcactggccgtcgttttacaacgtcgtgactgggaaaa ccctggcgttacccaacttaatcgccttgcagcacatccccctttcgccagctggcgtaa tagcgaagaggcccgcaccgatcgcccttcccaacagttgcgcagcctgaatggcgaatg gcgcctgatgcggtattttctccttacgc lucy-1.20p/PUC19splice.for0000644000245300000770000000071207227110052014472 0ustar mholmestigr>PUC19.for.begin gcgtaaggagaaaataccgcatcaggcgccattcgccattcaggctgcgcaactgttgggaagggcgatc ggtgcgggcctcttcgctattacgccagctggcgaaagggggatgtgctgcaaggcgattaagttgggta acgccagggttttcccagtcacgacgttgtaaaacgacggccagtgaattcccaatgtgCTGGAAAGGG >PUC19.for.end CCCTTTCCAGCACActgggtacccgggatcctgcaggtcgaccagcacaCTGGcaagcttggcgtaatca tggtcatagctgtttcctgtgtgaaattgttatccgctcacaattccacacaacatacgagccggaagca taaagtgtaaagcctggggtgcctaatgagtgagctaactcacattaattgcgttgcgctcactgcccgc lucy-1.20p/PUC19splice.rev0000644000245300000770000000071307227110053014502 0ustar mholmestigr>PUC19.rev.begin gcgggcagtgagcgcaacgcaattaatgtgagttagctcactcattaggcaccccaggct ttacactttatgcttccggctcgtatgttgtgtggaattgtgagcggataacaatttcac acaggaaacagctatgaccatgattacgccaagcttgCCAGtgtgctggtcgacctgcag gatcccgggtacccagTGTGCTGGAAAGGG >PUC19.rev.end CCCTTTCCAGcacattgggaattcactggccgtcgttttacaacgtcgtgactgggaaaa ccctggcgttacccaacttaatcgccttgcagcacatccccctttcgccagctggcgtaa tagcgaagaggcccgcaccgatcgcccttcccaacagttgcgcagcctgaatggcgaatg gcgcctgatgcggtattttctccttacgc lucy-1.20p/README.FIRST0000644000245300000770000002443510770301445013544 0ustar mholmestigrCopyright 1995-2004 The Institute for Genomic Research. All rights reserved. ---------------------------------------- Installation 1. To install Lucy, type "make" in this directory. Fix any compiler or makefile incompatible errors, then move the executable "lucy" to your local binary directory, such as "/usr/local/bin". If your operating system does not support the standard POSIX Pthread library to allow multi-threading required in this version of lucy, use the included version lucy-s of lucy which is also included in this release. Just "cd" to its directory and "make" there. It is functionally identical to this version except it won't take advantage of multiple CPUs on your machines. 2. Also, move the manual page file "lucy.1" to your local man page directory, such as "/usr/local/man/man1". Don't forget to remake your manual page index or you will need to type "man -F lucy" each time you want to get the Lucy manual page. You can also type "man ./lucy.1" in this directory to quickly see the manual page and/or make a printout. 3. A Postscript version of the manual page has been included as well. To print the manual page from this file, dump the Postscript file "lucy.ps" to your Postscript-capable printer. ---------------------------------------- Testing 1. To test the correctness of installed Lucy, type the command lucy -v PUC19 PUC19splice atie.seq atie.qul atie.2nd -debug lucy.info in this directory. Check the generated files lucy.seq and lucy.qul, see if they are reasonably correct (what does that mean? :). Also, compare the content of the information file "lucy.info" with the included "lucy.debug" file to see if they are the same (using the Unix "diff" command). If not, something may be wrong. Note that in the CLZ fields there may be some difference when you are running lucy on a different platform other than Linux PC, but they usually won't influence the outcome of lucy trimming. See the FAQ below if you are curious. (If you have multiple CPUs in your computer, type the same command above with the additional option "-x CPU_count". You should see a dramatic speedup of lucy and you should obtain the same output from lucy with or without this option.) 2. Use Lucy on your own data, see if it works as expected. 3. For more information please see the manual page. I hope this program is useful to you. ---------------------------------------- Quality trimming parameters Note: do NOT turn on Phred trimming if you intent to feed its output directly to lucy; trimming in Phred shortened the sequences and can prevent lucy from seeing the vector fragments at the ends, resulted in untrimmed vector fragments. Keeping as much data as possible for lucy is your best strategy. Lucy does a decent job of both quality and vector trimming, when you give it enough data to see the whole picutre of a sequence! The quality trimming parameters that we use in TIGR depend on a couple of factors: was the sequence run on an ABI 377 or a 3700, and is the project a BAC-end project or a non-BAC project. Here are the 4 cases: (actually, the quality trimming is the same for all BAC-end projects regardless of machine type.) NonBAC3700="-error 0.025 0.02 -bracket 10 0.02 -window 50 0.03" NonBAC377="-error 0.025 0.02 -bracket 10 0.02 -window 50 0.08 10 0.3" BAC3700="-error 0.025 0.9 -bracket 10 0.02 -window 50 0.07" BAC377="-error 0.025 0.9 -bracket 10 0.02 -window 50 0.07" The real difference between 377 and 3700 is the issue of whether the quality values were produced by phred or by TraceTuner. TraceTuner is a 3rd party product that calls quality values on sequences run on a 3700. I think that the best parameters to use would be lucy's default set: LucyDefault="-error 0.025 0.02 -bracket 10 0.02 -window 50 0.08 10 0.3" ---------------------------------------- Frequently asked questions 1. Why does lucy only provide the coordinate of good quality regions instead of directly removing the bad regions of sequences? We do not recommend physically removing the bad regions from each sequence because many sequence assembly programs can still benefit from these so called "overhang" regions to improve the chance of making a successfully assembly. If you must remove those bad regions for your purposes you can use the included simple AWK script "zapping.awk" to do it or write your own scripts. 2. Can I run lucy on my XYZ type machine? At TIGR, we run Lucy on a Sun workstation, running the Solaris operating system (version 5.5.1). Lucy has also been compiled and run successfully under the Linux operating system, running on a PC. Although there are no known problems with Lucy under Linux, it has been exercised much less under Linux than under Solaris. We use the Sun Workshop C compiler for compilation under Solaris, and the gcc (Gnu C) compiler under Linux. I do not mean to imply that other compilers will not work, but these are the ones that have been tried here. Lucy has not been run on MacOS or Windows by us, although we believe porting it to these two platforms should not be too difficult since source codes have been included. It is very likely that lucy can run without any modification under a Windows command shell. 3. How's lucy's memory requirement? Lucy's memory requirement is very moderate. The memory usage does increase with the number of sequences being trimmed. However, Lucy does not read all of the sequence and quality data into memory at one time, but rather reads the data from disk as it is needed. For detail information about lucy's memory requirement, see the manual page. 4. How can I make lucy talk to my internal database server? Lucy does not access (nor depend on) a database server. It reads its input from ASCII text files, and writes its output also to ASCII text files. The input sequence and quality files are in multi-FASTA format, as are the output sequence and quality files. It is a design decision to separate lucy from any site specific assumptions. In TIGR, we use a separate program, ricky, to drive lucy and provide iuput/output between lucy and our database infrastructures. You may need to design similar driver programs if you wish to automatically upload lucy's output to your database. 5. Which base calling software should I use? Currently, we are using phred version 0.990722.g as our base caller for sequences from the ABI 377 sequencer, and TraceTuner (from Paracel) for sequences from the ABI 3700. I recommend that you use phred version 0.990722.g or later for 377 sequences. Some earlier version of phred produced non-zero quality values no smaller than 15. Older versions of lucy tends to overtrim sequences from those earlier versions of phred. Latest version of phred can be obtained directly from its authors . 6. I've downloaded and installed 'lucy', but I can't get it to produce the same debug info as in the distributed 'lucy.debug' file. That, according to the READ_ME, means something is wrong, right? Short answer: it's not a bug in lucy but just the different random number sequences generated on the two different platforms that are causing the difference in lucy output. You can safely use lucy on either platform and it should produce correct outputs. Long answer: in lucy's secondary sequence extension module, it calls random number generator to dertermine a real base when it sees letters such as N or B in a sequence that can mean more than one kind of nucleotides. This is safe since if the sequence is of high quality there won't be any N's in its ABI base call anyway. This is just to give lower quality sequences at the borderline of being dropped by lucy a chance to be salvaged if their random number determined DNA sequences match the Phred sequence well. Therefore, in case the random number generators on two different platforms produce different numbers, the converted ABI sequence will be somewhat different (at those N bases) and the match result may be different. If you look at the diff output between lucy.debug and lucy.info, you will notice that most matches reported at CLZ fields there are too short to cause any real difference in lucy generated final trimming output (i.e., CLR). You can think of them as just random noises. However, there are indeed three differences in the final lucy output file lucy.seq between the two platforms (Linux and Solaris): >ATIEG51TR was dropped on the Solaris side but included in the Linux >side. >ATIEO52TF was included on the Solaris side but dropped in the Linux >side. >ATIEO93TF was included on both sides but its reported good regions are >different between the two sides: < >ATIEO93TF 0 0 0 227 384 Solaris --- > >ATIEO93TF 0 0 0 49 179 Linux These three are the only differences between the outputs of lucy running on the two different paltforms with the atie test suite. If you look at the ABI sequence file (atie.2nd) and find the above three sequences in it, you will see a lot of N's scattered around their sequences. This is the reason of the difference. If you run lucy without the secondary sequence extension step, then you will get exactly the same outputs on both platforms (i.e., drop atie.2nd from the argument list, then run lucy again). So this is really a user choice: do you want to have more usesable data included by comparing against the ABI sequence and salvage some data at the risk of including some junks, or you want to have just higher quality data at the risk of losing some data that are still useful? Perhaps an answer to this is to to run lucy with the -inform_me option and double check those sequences lucy reports as 'salvaged'; you will find these three sequence names mentioned above in the lucy report, meaning that lucy knows they are right at the borderlines. :) ---------------------------------------- File list Information: Copyright - copyright notice HISTORY - lucy modification history README.FIRST - this file you are reading now lucy.1 - lucy's manual page in standard Unix man page format lucy.ps - lucy's manual page in Postscript format Source file: - source codes used to build the lucy program Makefile abi.c lucy.c poly.c qual_trim.c splice.c vector.c lucy-s/ - same set of source files for non-parallel lucy Test files: - files for testing lucy as mentioned earlier PUC19 PUC19splice PUC19splice.for PUC19splice.rev atie.seq atie.qul atie.2nd pSPORT1splice - these four files were mentioned in HISTORY pSPORT1vector ARMTM40TR.seq ARMTM40TR.qul lucy-1.20p/abi.c0000644000245300000770000002411107651004563012671 0ustar mholmestigr/**************************************************************************** * * Copyright (c) 2003, The Institute for Genomic Research (TIGR), Rockville, * Maryland, U.S.A. All rights reserved. * ****************************************************************************/ #define VERYBAD 16 static struct stack_struct { int i, j, m, c; } stack[100]; static int abi_size=16; static unsigned abi_mask; struct abi_struct { unsigned tag; int index; } *abi_well; struct hit_struct { int diff, count; } *hit_well; static condition[]={ -1, -1, -1, -1, -1, -1, -1, -1, -1, 0, /* 0-19 */ 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, /* 20-39 */ 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, /* 40-59 */ 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 6, 9, 9, 9, 9, 9, 9, 9, 9, 9, 9, 9, /* 60-79 */ 9, 9, 9, 9, 9, 9, 9, 9, 9, 12, 12, 12, 12, 12, 12, 12, 12, 12, 12, 12, /* 80-99 */ 12, 12, 12, 12, 12, 12, 12, 12, 12, 15}; static int badness[16][16]= { /* A C G T U R Y M W S K D H V B N */ /*A*/ { 0, 3, 3, 3, 3, 1, 3, 1, 1, 3, 3, 1, 1, 1, 3, 2}, /*C*/ { 3, 0, 3, 3, 3, 3, 1, 1, 3, 1, 3, 3, 1, 1, 1, 2}, /*G*/ { 3, 3, 0, 3, 3, 1, 3, 3, 3, 1, 1, 1, 3, 1, 1, 2}, /*T*/ { 3, 3, 3, 0, 0, 3, 1, 3, 1, 3, 1, 1, 1, 3, 1, 2}, /*U*/ { 3, 3, 3, 0, 0, 3, 1, 3, 1, 3, 1, 1, 1, 3, 1, 2}, /*R*/ { 1, 3, 1, 3, 3, 1, 3, 2, 2, 2, 2, 2, 3, 2, 3, 3}, /*Y*/ { 3, 1, 3, 1, 1, 3, 1, 2, 2, 2, 2, 3, 2, 3, 2, 3}, /*M*/ { 1, 1, 3, 3, 3, 2, 2, 1, 2, 2, 3, 3, 2, 2, 3, 3}, /*W*/ { 1, 3, 3, 1, 1, 2, 2, 2, 1, 3, 2, 2, 2, 3, 3, 3}, /*S*/ { 3, 1, 1, 3, 3, 2, 2, 2, 3, 1, 2, 3, 3, 2, 2, 3}, /*K*/ { 3, 3, 1, 1, 1, 2, 2, 3, 2, 2, 1, 2, 3, 3, 2, 3}, /*D*/ { 1, 3, 1, 1, 1, 2, 3, 3, 2, 3, 2, 2, 3, 3, 3, 3}, /*H*/ { 1, 1, 3, 1, 1, 3, 2, 2, 2, 3, 3, 3, 2, 3, 3, 3}, /*V*/ { 1, 1, 1, 3, 3, 2, 3, 2, 3, 2, 3, 3, 3, 2, 3, 3}, /*B*/ { 3, 1, 1, 1, 1, 3, 2, 3, 3, 2, 2, 3, 3, 3, 2, 3}, /*N*/ { 2, 2, 2, 2, 2, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3, 3}, /* A C G T U R Y M W S K D H V B N */ }; static int Dlist[]={ 0, 2, 3}, Hlist[]={ 0, 1, 3}; int abi_code(c) int c; { register int tmp; switch (c) { case 0: tmp=0; break; case 1: tmp=1; break; case 2: tmp=2; break; case 3: case 4: tmp=3; break; case 5: tmp=random()%2 ? 2 : 0; break; case 6: tmp=random()%2 ? 3 : 1; break; case 7: tmp=random()%2 ; break; case 8: tmp=random()%2 ? 3 : 0; break; case 9: tmp=random()%2 ? 2 : 1; break; case 10: tmp=random()%2 ? 3 : 2; break; case 11: tmp=Dlist[random()%3]; break; case 12: tmp=Hlist[random()%3]; break; case 13: tmp=random()%3; break; case 14: tmp=random()%3+1; break; case 15: tmp=random()%4; break; default: giveup("how can other cases happen in tag_code?"); } return tmp; } void abi_sort(l, r) struct abi_struct *l, *r; { register unsigned v; register struct abi_struct *i, *j, tmp; if (r>l) { v = r->tag; i = l-1; j = r; while (1) { while ((++i)->tag < v) ; while (j>l && (--j)->tag > v) ; if (i>=j) break; tmp = *i; *i = *j; *j = tmp; } tmp = *i; *i = *r; *r = tmp; abi_sort(l, i-1); abi_sort(i+1, r); } } void prepare_abi_mask() { register int i; register unsigned acc; /* construct abi_mask */ for (acc=i=0; iabi_well[m].tag) l=m+1; else { l=abi_well[m].index-i; for (j=0; jcount) { count=hit_well[j].count; diff=hit_well[j].diff; if (j) { hit_well[j]=hit_well[0]; hit_well[0].count=count; hit_well[0].diff=diff; } } break; } if (j>=hit_len) { hit_well[j].count=1; hit_well[j].diff=l; hit_len=j+1; } break; } } } /* calculate starting points for sequence a and b */ if (count<=0) { *start=*end=0; return; } else if (diff>=0) { i=diff; j=0; } else { i=0; j=-diff; } /* find the primary alignment region first */ for (span=0, left=x=i; icondition[m]; m++, l++, r++) if (badness[a[l]][b[r]]) count+=badness[a[l]][b[r]]; if (lspan) { left=x; span=i-x; } x=i+1; } if (i-x>span) { left=x; span=i-x; } if (span<=0) { *start=*end=0; return; } /* extend alignment region toward the right, if possible */ for (i=left+span, j=i-diff; i0) { for (count=stack[--x].c, m=stack[x].m, l=stack[x].i, r=stack[x].j; lcondition[m]; m++, l++, r++) ; if (l>=width || r>=height) continue; if (count<=condition[m]) break; if ((count+=badness[a[l]][b[r]])0) { for (count=stack[--x].c, m=stack[x].m, l=stack[x].i, r=stack[x].j; lcondition[m]; m++, l++, r++) ; if (l>=width || r>=height) continue; if (count<=condition[m]) break; if ((count+=badness[a[l]][b[r]])0) { for (count=stack[--x].c, m=stack[x].m, l=stack[x].i, r=stack[x].j; lcondition[m]; m++, l++, r++) ; if (l>=width || r>=height) continue; if (count<=condition[m]) break; if ((count+=badness[a[l]][b[r]])=0 && j>=0; i--, j--) if (badness[a[i]][b[j]]) { x=0; stack[x].i=i-1; stack[x].j=j-1; stack[x].m=0; stack[x++].c=0; while (x>0) { for (count=stack[--x].c, m=stack[x].m, l=stack[x].i, r=stack[x].j; l>=0 && r>=0 && badness[a[l]][b[r]]==0 && count>condition[m]; m++, l--, r--) ; if (l<0 || r<0) continue; if (count<=condition[m]) break; if ((count+=badness[a[l]][b[r]])=0 && r>=0 && count<=condition[m]) continue; x=0; stack[x].i=i-1; stack[x].j=j; stack[x].m=0; stack[x++].c=0; while (x>0) { for (count=stack[--x].c, m=stack[x].m, l=stack[x].i, r=stack[x].j; l>=0 && r>=0 && badness[a[l]][b[r]]==0 && count>condition[m]; m++, l--, r--) ; if (l<0 || r<0) continue; if (count<=condition[m]) break; if ((count+=badness[a[l]][b[r]])=0 && r>=0 && count<=condition[m]) { j++; continue; } x=0; stack[x].i=i; stack[x].j=j-1; stack[x].m=0; stack[x++].c=0; while (x>0) { for (count=stack[--x].c, m=stack[x].m, l=stack[x].i, r=stack[x].j; l>=0 && r>=0 && badness[a[l]][b[r]]==0 && count>condition[m]; m++, l--, r--) ; if (l<0 || r<0) continue; if (count<=condition[m]) break; if ((count+=badness[a[l]][b[r]])=0 && r>=0 && count<=condition[m]) { i++; continue; } break; } span=left+span-i-1; left=i+1; *start=left; *end=left+span-1; } lucy-1.20p/atie.2nd0000644000245300000770000441120207227110054013316 0ustar mholmestigr>ATIEC01TR GCCAGTGTGCTGGAAAGGTTTTTTGAAAACAAACAAACTTTAATTTTTTCAAAATATTTT CATTTTTATGGTTTGTTCGGATAAATGATCTAACATGCAGGAGGATAACAGAATTGCCTC TCTCTTTTTGGTGCAACCATCATCTTAGGAAAAATGCATTATACTAAAAATCACAACCTT TTTTTTATTGGGTGTGTTTTGACCATTCAACCACGAAAATCAAAGGTTTCAGTTTGTATT GTTGTTAAAATTTCTGATAGAGGAATGGGGAGCGCTCTGCTTCTGAACGAGAAAGAGGGT TTCAGGGCAGAGTAGTCACACACTTCGGGAAGCCAAAAACGGTCTGGTCCAATTTTAAAA ACACGAAAGAGACAAATCTACTCAATTGGTCAAATTAAACCTCGAACGGACCAATACTGT TGTTATTGCTGTTTTTGGTGAATGGTCCTTTTTTTTTATTTCTAAAACATCACAGACTTC AGACTTCTTTCTCTTCTACTACAATTTATTCTCTTACGTATTTATTTATTTTGATGGTCA TTTTTACTTCATTCACTTCACAATTGCATAAAGAAAGTAAAGATTTTGAAGAAAACAAAC GTAGTTAGTAGAAGAGTAAGAAAAGTCTACAATCAAATTTAAAACATTTCCAAAAGTAGA CAGANAGTGACAGATTGAAACCCATGTGAATAAATAAATGACAATTCCATAAGACGTTTT TGNGTAATAGTATTAAGTAACGTCATAATCGAAAGATTGACAGATTAGAAAAGTNAATAA TTAAAAATGGTTATAATGGGGGGGACTAAGGCAAACGNNAGGACNTGAGAAGCTTCTCTT CATTGGAAAACTCTTTCCTTTAAACTCCAATTTCCAANGCAAANCCGGGGGGGNCTTTTA CCNAAGGANTTTTAGNTCATGGCCCAAAAATGGNTTTTTTTTNCCNACNCTTNATGGGNN TTTTTGGNCTTCNAGGNGGGCCCATTGAAATTTTTTAACCATNNNAATTNANTCCCAACC TNNCNCTCANNATTTTCNTTTAAAAAGAGNGACNNACTTTGNAANNNNNTNNNNNNNNTT NANNAAAAAAANNNTNGTNNNAGGNNCNTTTTNNCCCNGGGAAAAAAANGNNGNNNAAGT TTTATANANGGNTNNNNNNNNNCNNGGNAAAATAAAANGGGNNCNAAANGNGGTNTCCNT TTNCCAAAAAAAAANCCNNTTTTAAAANNNNTNNTTTTAAAAANGGGGGCAAAAGGNCNN NCNNTNTNAANANNNGGGGGGCC >ATIEC02TR CTGATACTGGTCCACTCAGTAACTCGTCCCTTCAGAGTGGACAGGGGACCCAACAAGCAC AGCAGCGATCAGGATTTACCAAACAGCAACTCCATGTTCTCAAAGCCCAGATACTGGCAT TTAGGCGTTTGAAGGTTTTCAGCTCTGACTTTTTCCTTATGTCTTCATTTTTATTGTATG TTTTGCTGGAGATGTATGCCTATAAATAACGTGTCTGCAAGCCAGGTTGAATGTTTTTAA TTGCTTTTTTTTGACAGAAAGGGGAAGGTTCTTTGCCTCCGGAGCTTCTTCAAGCTATTT CTCCACCACCGCTTGAACTACAGACGCAGAGGCAAATATCTCCTGCCATAGGGAAAGTTC AGGATAGATCTTCAGACAAAACTGGAGAAGACCAAGCAAGGTCGCTAGAGTGTGGCAAGG AGTCTCAGGCTGCTGCTTCTTCAAATGGACCAATTTTTTCTAAAGAGGAAGATAATGTTG GAGATACAGAAGTAGCTTTGACGACAGGCCACAGCCAATTATTTCAAAACCTGGGAAAAG AAGCTACTTCTACTGACGTGGCTACGAAAGAGGAGCAACAGACTGATGTATTCCCTGTTA AGTCAGACCAAGGAGCAGATTCTAGTACTCAAAAGAATCCTAGAAGTGATTCTACAGCTG ATAAGGGAAAGCTGTTGCATCTGATGGAAGCCAATCTAAGGGTCCTTCACAAGCAAACTC TCCCACCCGGCCAAGGATACAGCCTCTGNCAAGGAAATATTATGGGCCCGTGGTTTGATT TTCCTTTTTACTCGAAAACTTGCTCTTATGGGNCTGNACAGCCAATGCCATTACCANTCT ACATTNCNTATGATATTAAAGATCTGTTTGNAAAAAGGGCNAAGTTCTTATANGAAAGNC CGCCAGTTNAAAAAAAAANGGTCTGTNGCAAAAATTANCCGAANAACTGCCTTTTACCAA 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ATGGAGATCCAGTTGCCTTCTTACAAAGCAATCTCTTTAGGTGTCAAAAGCGCTTGTACT AGTGTGGAAACTGGAAAATATACACATACACTTTTTTTTCTTTCTAATTTGGTAATTATC TATTTCTATTCACTTTTTTTTTCATTCACTTTCATTGTATGCTTACTATAAGAGGCCAAA TATATAACACATACGTTCTGATTTGCAGTAGAAATGACAGAATCGTACAACAGTATTAAA TGTTGAAATGGATTTGTAGAATTATGATTTATGACACACAACTTATTTAAGTGAAAGTTT ACNAAATGACAAATTTTACTTATGTTACTAAAATAACGACNATACGGCTTACTAGTATAA AATAGAAATTTCCATTTCACAAAGATGGTAAAAACCGTAAAATGCTGATGAAATCGCAAA ATCATTTTTTTTACTACCAAAGAGAACCATTGGTACACCGATACAAGCTTTAGCTTTAGC ATGTGTCGCAGTAGTCGAGACAAAATATAAATNCCGCGGTCTTTAGTTTCGGTGGNAAAC GAGAGAATTAATGACTAATGATATAGATAATNAAGTAACATGNGATATTNCGATTGGAAT ATTAANCCTTAAANTGGTTGAANGGTGGCTGGAATACTATTAATNCCAGGGAATAACNNN CTNGGNACTACTTTATAAGGNTNATCNTATTTACCACTTTNAAANGAATTTTNAAANCCC NTTGGANCAAANTGGGGGNTTAAAGCCANGGNAAANNCNNNNANGTGNCCAAAATNNTTA ATNCCCNTTTTCNNGGAAACCCGATTNAAAATNTNGGGNNTNNTNNNGNAGGGNANTTTN NNAANNNNAAANTNNNNGGNTTCCTNNGGNAACCNAAATTNNGNNNAAAACNGGGTTTTN AAAANNNNTTNGAANCNTTNTTTTTTNGGAAANNNGGGNNTTTNNCCANAANTTGGNTNT NNNCCCCNNNNNNNNNAAAAAANNNGNTNNNNNNNNGNNTTTTTNNNGGNNNNAAAATTN NGGGNNNTTTCNNGNNCNANNNCC >ATIEC07TR GAGCCGTAAATTTCGCTATACGATATGGGACACGTGTCGTGAATCTACTCGTGGTATCGG TTACTTAATGAAAAGGCACCATTCAACGTTTTCTTCCTTATCGTTGCCTACACGTTTCAA GGCTCTGCTTCTCCGTCAATTAACGTCCGTTTTCGTCATCAAAATACTAACGCCGNTGAT GACCTTATTTAAAAATTAACTCCGAACCACGACGTTCGGGTTTTGGAACCTCAGGCTCGT GGTTATAAAAGTCTTGTGTGAAACCTATTATATTTGCCATTGCTTAATCCTCTCCTCTCC TTCACGTTGAGATATTNTTGAGTTTTCTGTGTTGAATTTTGGGGAATCGAAGAAATTGAA TTTCAAAAATCAATGGCGGAAGAAATTGAAAAATCTGTGCCGACAGAGGAATCTCTGATG GAGAAGATCTCCGAGAAGATTCACCATCACGATTCGTCGTCATCGTCTGAATCCGAGTAC CGAGAAACCTGATTCTCCTTCGGCTGTGAAGGCGAAGATCTATCGTATGTTTGGCAGAGA GAAGCCTGTTCACAAGGTTCTCGGTGGTGGAAAGCGTAAGGGTTTTATATATTCANTGNC TCGCTTTTCTTTTTCTATCATTGCTTTCTCTGGTTTGATCGATTTGGAACATGCGTTGAT GCTTGATCTGCAATGTTAGGGTCTAGNTACACTCGTATAAGATCGCTTGGTGATGATACA TAATTGCATTTTCTTGAATCGATCCATTAAGATTTGGGCATNCAAAAGAAGACTTGAACT TTAGGGATAATGNTTTNGAATAGGGAGAAGTNCTTANNTGGTTNGTTAGATTGAAGACTT TACGTTCTCTAATTTTGCACTGGGGGAAATTTNGTCCCCATTTTTGTTGATGCATAAATG GNTTNATGGGTNAAAANGNAANGCCTCGGNTCTGGGGAANNGATTTTNGGTNCNAAAAAN TTTNNNGGNNAGGGTTTTTNGGGGGGNAAAAANNTCNGGCNGGNTNGGGNNNNNNNNNTT GGNTNTNTNACCGGGGGGNTAATNNGNNNNTTGNNCAATAANCNNNNTGGGNCTTTTNNN CCANCCCCTTTTNNAANANANAACCNTTTTTTNCCCCCNATANTTTTNGGNNAAAGNNAN CCNTTTTTTNGGGGNNCAANNNAAAANTCCNGGNTTNGNTTTTAAAAAANNNTTTTNNNN NNNTNNGNNAAAAGGGNNNTTNCNNGGNNANNNAANANNNNNNNNNNTGNNGNNNNAAAN NNNNCNNNNNNC >ATIEC09TR CATCTGTTTGGCTTGAAAAAATCACTGCTCTCTTTGTAGTGATCCAATCTTTCTAAACCT GTTTCAATCAAAGGAACAAATCAGAGGCTTTGATCTATAGTTAAGTGCAATTAGTAGTAA CAAATGAAAAATGCAATATTGAGCTAATATCGAGTGACTCTGCTTCTTGTTACCATACAC GTATGTAATCTTTCATGATCTTTAGATTCACGGGTCCCTTGAGAGATCTTTTACAGTTGA AAAAAGCTTCTCTCTTCACATGGATTTAGTGTCTTCAAGAGATACTTTAGGAGATCCTTC AACTTCAACAAAAGCCCTTCTTCTTGGTTTCTCTCGTTCTCGGTCTGATCATTGCATCAT CATGTCTGGAGAATCAAGCTCTGGTTCTACCGAACATTGCATCAAAGTTGTACCGACACA CGGTGGCCGCTATGTTCAGTACAACGTTTATGGACAACTCTTTGAAGTTTCCAGAAAGTA TGTCCCTCCTATTCGCCCATTGGTAGAGGCGCTNGCGGTATTGTCTGGTAAGTTCTNTTG 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lucy-1.20p/lucy.10000640000245300000770000005321107774323224013033 0ustar mholmestigr.PU .TH LUCY 1 10/28/2000 "TIGR software" "Sequence Assembly Utilities" .SH NAME .B lucy \- Assembly Sequence Cleanup Program .SH SYNOPSIS .ll +8 .B lucy [-pass_along min_value max_value med_value] .br [-range area1 area2 area3] [-alignment area1 area2 area3] .br [-vector vector_sequence_file splice_site_file] .br [-cdna [minimum_span maximum_error initial_search_range]] [-keep] .br [-size vector_tag_size] [-threshold vector_cutoff] .br [-minimum good_sequence_length] [-debug [filename]] .br [-output sequence_filename quality_filename] .br [-error max_avg_error max_error_at_ends] .br [-window window_size max_avg_error .br [window_size max_avg_error ...]] .br [-bracket window_size max_avg_error] .br [-quiet] [-inform_me] [-xtra cpu_threads] .br .B sequence_file quality_file [2nd_sequence_file] .SH DESCRIPTION .I Lucy is a utility that prepares raw DNA sequence fragments for sequence assembly, possibly using the .I TIGR Assembler. Raw DNA sequence fragments are obtained from DNA sequencing machines, such as those from the Applied Biosystems Inc. (ABI). .I Lucy accepts three input data files: the .B sequences file, the .B quality file, and (optionally) a .B second sequence file for comparison purposes. All three files should be in the plain FASTA format. .PP The first sequence file and its accompanying quality file are obtained from other utility programs, such as .I phred(1), which reads the sequencing machine chromatograph outputs and generates sequence base calls in a sequence file together with a quality assessment file for each base call made. The optional second sequence file usually comes directly from the sequencing machine itself and are used to reassure/enhance the quality of the sequences. .PP .I Lucy makes no assumption about the order of sequences in the three input files. As long as all necessary information can be found, DNA sequences and quality sequences can be in different order. A sequence without its quality assessment companion or vice versa will be reported as an error. The second sequence file is allowed to have missing sequences that appear only in the first sequence file. Sequences that appear only in the second sequence file will be reported and ignored by .I lucy. .PP The operations of .I "Lucy" are divided into 7 phases: .TP .B Phase 1: Count the number of input sequences in the first sequence file, and create internal data structures accordingly. .I Lucy allocates memory dynamically, so there is no preset limit on the size of input files. The size of input files is only limited by your available computer memory. Note that lucy's static memory requirement grows very slowly with the number of input sequences, at roughly 60 bytes plus the sequence name storage for each input sequence. This is because lucy does not store any sequence data in the memory after processing them. Therefore, by all practical considerations lucy can handle any number of input sequences. The dynamic memory requirement of lucy is proportional to the longest sequence in the input, not the number of sequences, but its actual size varies from processing phases to phases. .TP .B Phase 2: Read all sequence information, including name, length, and positions. To save memory, .I lucy does not load all sequences data into main memory at once. Instead, it uses direct file addressing to access each sequence only when it is needed. Therefore, it is very important that the content of the input files stays unchanged during runtime. .TP .B Phase 3: Read the quality information for sequences, and compute good quality regions, i.e., regions within sequences that have higher quality values and can be trusted to be correct. .I Lucy determines a "clean" range which has an average probability of error (per base) that is no greater than the probability specified by the -error option (or the default, if -error is not used). Note that secondary sequence extension (next step) is performed after quality trimming. Because of this, it is possible that the final "clear" range (after vector trimming) will have a probability of error which is greater than the specified value. .TP .B Phase 4: Read the second sequence file, compare its sequences to the first sequence file, and extend good quality regions if they both agree. If the second sequence file is not provided, this step is skipped. Note that this sequence comparison phase will not in anyway shorten the good quality region determined by the previous phase; it will only extend it if possible. It is very important that the second sequence file does .I not come from the same base calling software as the first sequence file, and is base-called with .I different algorithms. Otherwise, if the two sequence files are identical, .I lucy will extend sequences all the way to both ends, and completely ruin the purpose of quality trimming done in the previous phase. Usually, the first sequence file comes from .I phred(1) with the companion quality file, and the second sequence file comes directly from the original ABI base calling software with the sequencing machines. .TP .B Phase 5: Locate splice sites on ends of sequences. In this phase, .I lucy tries to compare all input sequences against splice site sequences in a splice site file which defines the vector sequences near the insertion point on the vector. If splice site sequences are found on any input sequence, they will be excluded from the good quality region so that the sequence assembly program will not mistakenly take them into account when trying to reassemble the sequences. Note that .I lucy assumes all input sequences are read from the same direction and matching the direction of the splice site sequences. Therefore, the forward and reverse read sequences of a clone should not be mixed together in a single input file. If such a mixture of forward and reverse read sequences is unavoidable, .I lucy can be run twice to check in both directions, once with the forward splice site sequences, the other time with the reverse splice site sequences. See the description of option .B -vector below for more details. By popular demand, a poly-A/T trimming feature has been built into .I lucy. It is designated Phase 5a and is an optional step. See the options .B -cdna and .B -keep below for details of their usage. .TP .B Phase 6: Remove vector insert sequences. In this phase, all input sequences are checked against a full length vector sequence in a vector file, and sequences that are vector inserts themselves will be detected and removed. .I Lucy uses a quick fragment match method to check for vector sequences. Both the target vector sequence and the input sequences are converted into fragments (range from 8 to 16 bases long, default is 10), and matching fragments are detected quickly. Vector sequences are detected when they contain more matches to vector fragments in their good quality region (already excluded of splice site sequences done previously) than a normal, non-vector sequence can possibly match by chance. The default cutoff threshold is 20%. A sequence which contains over 20% match to the vector will be considered a vector insert and discarded. .TP .B Phase 7: Produce output sequences for fragment assembly. In the final phase, .I Lucy produces two output files, the cleaned sequence file with markers for good quality regions, and a companion quality file. Optionally, .I lucy can also generate a cleavage information file (i.e. the good quality region information) which can be used to update database. .PP Each sequence in the output sequence file begins with a header that includes its name, three pass along clone length values to the fragment assembly program, and a left and right marker denoting the begin and end of the .B good quality, vector free region. The following is an example of .I lucy output: .PP >GCCAA03TF 1500 3000 2000 43 490 .br AGCCAAGTTTGCAGCCCTGCAGGTCGACTCTAGAGGATCCCCAGGATGATCAGCCACATT .br GGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATCTTGCGCAATGG .br GCGAAAGCCTGACGCAGCCATGCCGCGTGAATGATGAAGGTCTTAGGATTGTAAAATTCT .br TTCACCGGGGACGATAATGACGGTACCCGGAGAAGAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCCAGC .br ... .SH OPTIONS Note that .I lucy checks only the first letter of each option, so all options below can be represented by just typing the first letter, e.g. -p for -pass_along. .TP .B \-pass_along min_value max_value med_value The three pass along values of minimum, maximum and medium clone lengths are given using this option. .I Lucy does not interpret these values; they are used by some sequence assembly programs, such as .I TIGR Assembler. These values are directly copied over to the output sequence file. The default values are 0, 0, and 0. .TP .B \-range area1 area2 area3 This option is used in combination with the following option .B -alignment. It defines the three splice site checking areas which may need different strengths of splice site alignment. The quality of the base calls is usually poor at the beginning of a sequence but gradually improves when moving into the sequence read. Therefore, when looking for splice sites, stronger and stronger alignment measurements are needed to cope with the quality change. The default range values are 40, 60 and 100, i.e., .I lucy will check for splice sites at the first 200 DNA bases. If splice site is not found at the first 200 bases, the next 100 (=area3) bases will be checked, with a total checking length of 300. Once a splice site is found, the rest of the sequence after the splice site is searched for the other end of the splice site, if any, to guard against short inserts. .TP .B \-alignment area1 area2 area3 This option is used in combination with the previous option. It defines the three different alignment strengths for the three areas. An alignment within each area must be equal or longer than these values before it is considered a match of the splice site. Default values are 8, 12 and 16 for the first 40, 60 and 100 bases, respectively. .TP .B \-vector vector_sequence_file splice_site_file This option provides the complete vector sequence file and a partial splice site sequence file. .I Lucy expects to see one single (probably long) sequence of the vector that is used to do cloning in the vector file, and .B two splice site sequences .B before and .B after the insertion point on the vector in the splice site file. The splice site sequences are usually 150 bases in length, with a 50 bases overlay right around the vector insertion point. Their actual lengths are not very critical. For example, the followings are the PUC18 splice site sequences that can be used by .I lucy: >PUCsplice.for.begin .br gattaagttgggtaacgccagggttttcccagtcacgacgttgtaaaacg .br acggccagtgccaagcttgcatgcctgcaggtcgactctagaggatcccc .br gggtaccgagctcgaattcgtaatcatggtcatagctgtttcctgtgtga .br >PUCsplice.for.end .br acggccagtgccaagcttgcatgcctgcaggtcgactctagaggatcccc .br gggtaccgagctcgaattcgtaatcatggtcatagctgtttcctgtgtga .br aattgttatccgctcacaattccacacaacatacgagccggaagcataaa With two splice site sequences as above, .I lucy assumes all sequences from the input files are read in the same direction as the splice site sequences. If that is not true and the input consists of sequences from both forward and reverse reads of a clone, there are two options. One can either separate the sequences into forward and reverse read sets and run them through .I lucy with correct splice site sequences. One can also run .I lucy with a combined splice site file with .B both the forward and reverse splice site sequence pairs. That is, if .I lucy sees four splice site sequences, it will assume that a .B bidirectional splice site trimming has been ordered. For example, the following reverse PUC18 splice site sequences can be appended to the forward splice sequences above to instruct .I lucy to do bidirectional trimmings: >PUCsplice.rev.begin .br tttatgcttccggctcgtatgttgtgtggaattgtgagcggataacaatt .br tcacacaggaaacagctatgaccatgattacgaattcgagctcggtaccc .br ggggatcctctagagtcgacctgcaggcatgcaagcttggcactggccgt .br >PUCsplice.rev.end .br tcacacaggaaacagctatgaccatgattacgaattcgagctcggtaccc .br ggggatcctctagagtcgacctgcaggcatgcaagcttggcactggccgt .br cgttttacaacgtcgtgactgggaaaaccctggcgttacccaacttaatc Bidirectional trimmings will run about two times slower because each sequence is compared against two sets of splice site sequences when only one set is actually needed. It is possible that random alignments with the other (unneeded) set will result in somehow a shortened good quality region of a sequence. However, bidirectional trimmings can guarantee that there are no vector fragments in the good quality region even when the assumed direction of some sequence reads is wrong. During .B phase 6 contaminant removal, .I lucy will automatically reverse complement the full length vector sequence and check for both its forward and reverse inserts, so only one vector sequence is needed in the vector file. .I Lucy can also get the vector and splice site file names from the environment variables .B VECTOR_FILE and .B SPLICE_FILE, if they are not given at the command line. .TP .B \-cdna [minimum_span maximum_error initial_search_range] Since the release of .I lucy, many people have requested that a poly-A/T trimming feature be built into .I lucy for the convenience of people doing cDNA sequencing. This option is added for that purpose. By default .I lucy will not do this step, unless this option is given. This option can be given alone without any parameter, in that case the default values will be used, or it can be given with .B all three parameters. The .B minimum_span defines the minimum length of .I continuous poly-A or T before .I lucy believes that it has found them. The .B maximum_error denotes the maximum number of errors allowed before a new continuous poly-A/T region stops. If mismatch error count goes beyond maximum_error, then .I lucy believes that it has reached the end of the poly-A/T tail/head. Note that each new continuous poly-A/T region that is more than minimum_span long will reset the error counter to zero, therefore an interleaving number of maximum_error followed by minimum_span can keep the poly-A/T region expanding. The last parameter .B initial_search_range denotes the range from the ends of a sequence within which a minimum_span number of continuous poly-A/T's have to be found, otherwise .I lucy believes that it cannot find poly-A/T regions for the sequence. Note that the ends of the sequence are related to the clear region .B after vector splice sites trimming, not to the actual physical ends of the sequence. The default values of the three parameter are minimum_span=10, maximum_error=3 and initial_search_range=50. .B Warning: these three parameters have to be set carefully in order to avoid throwing good sequences away in the middle of a sequence, or to let poly-A/T regions slip by at the ends of a sequence. .TP .B \-keep When .B -cdna option is turned on, .I lucy will trim all poly-A/T fragments it finds. This is good for EST clustering purposes, where you don't want the poly-A/T fragments to stay. However, if you want to see the EST sequence in its entirety to know its direction, it is not helpful to trim poly-A/T away. The .B -keep option, when used in combination with the .B -cdna option, will preserve the poly-A/T tails/heads at ends of each EST sequence to keep them as tags indicating the direction of the EST sequence. .TP .B \-size vector_tag_size This option is used in combination with the following option. It defines the size of fragments for checking vector using the fragment matching algorithm. The default value is 10 bases. The range of acceptable values are 8 to 16. .TP .B \-threshold vector_cutoff The option is used in combination with the previous option. It defines the threshold of similarity between a sequence and the vector for it to be considered a vector insert. Since splice sites are not included in vector screening, any sequence which has a higher than normal similarity to the vector sequence will be considered a vector itself and discarded. The default value of cutoff is 20% of the good quality region. .TP .B \-minimum good_sequence_length After all kinds of checking, comparing and trimming, the good region of a sequence must still be long enough than the minimum length for it to be considered useful to the sequence assembly program. We do not want our sequence assembly program to be bothered by many small, trashy fragments. The default minimum good sequence length is 100 bases. .TP .B \-debug [filename] This option, if given, tells .I lucy to produce a sequence cleavage information file for reference or for updating the database. The default file name is "lucy.debug", which can be overridden by the given file name. .TP .B \-output sequence_filename quality_filename This option defines the output sequence and quality file names. If not given, the default file names .I lucy uses are "lucy.seq" and "lucy.qul". .TP .B \-error max_avg_error max_error_at_ends There are three main steps in the quality trimming performed by .I lucy. The first involves removing low-quality bases from each end of the sequence, using the criteria specified by the .B -bracket option. The second involves finding regions of the sequence where the probability of error meets all of the criteria specified by the .B -window option. After these regions are found, the third step is to trim each of them to the largest region having an average probability of error no greater than the max_avg_error specified by the .B -error option. Finally, the largest region meeting all of the criteria is chosen as the final "clean" range. Two parameters are specified with this option: max_avg_error is the maximum acceptable average probability of error over the final clean range. max_error_at_ends is the maximum probability of error that is allowed for the 2 bases at each end of the final clean range. The defaults are 0.025 and 0.02, respectively, if .B -error is not specified. Note: A base's estimated probability of error is calculated from the quality value that is assigned by the base caller. The quality value (Q) is defined as: Q = -10 * log10(Probability of error) .TP .B \-window window_size max_avg_error [window_size max_avg_error ...] .br This option affects the quality trimming of the sequence (see the description of the .B -error option, above). It specifies one or more window sizes, and a maximum allowable average probability of error for each of those window sizes. If more than one window size is specified, they must be specified in decreasing order by window size. The maximum number of windows that may be specified is 20. .I Lucy uses a sliding window algorithm to find regions of the sequence within which the average probability of error, within any window of the specified size, is no greater than the specified max_avg_error. Regions which meet all of the specified window criteria are then trimmed again using the criteria specified by the .B -error option, and the final "clean" range is the largest region that meets all of the criteria. If the .B -window option is not specified, then .I lucy uses 2 windows by default, of 50 and 10 bases. The default maximum allowable probabilities of error in the two windows are listed below: 50-base window: 0.08 .br 10-base window: 0.3 .TP .B \-bracket window_size max_avg_error This option controls the initial quality trimming step, which is the removal of low-quality bases from both ends of the sequence. .I lucy looks for the first and last window of size window_size having an average probability of error no greater than max_avg_error. The subsequence which extends from the first base of the first such window to the last base of the last window is then examined further to find the clean range. Bases which precede the first window or follow the last window are excluded from the clean range (so the two terminal windows bracket the clean range). The defaults for window_size and max_avg_error are 10 and 0.02. .TP .B \-quiet Tells .I lucy to shut up and only report serious errors it finds. :) .TP .B \-inform_me Asks .I lucy to report sequences by names that have been thrown out due to low quality values, or salvaged due to comparison to the 2nd sequence file. .TP .B \-xtra cpu_threads .br If you have multiple CPUs in your computer, you can dramatically increase lucy's speed by allowing lucy to run multiple execution .I threads concurrently. For example, if you have a dual-CPU computer, you can give the option .B -xtra 2 to cut lucy's execution time roughly in half. By default, lucy will run just one thread if this option is not given. The maximum number of allowable threads is 32. Note that this option is only available with the multi-threaded lucy version 1.16p. There is also a 1.16s version that does not do multi-threading. .SH ENVIRONMENT The environment variable .B VECTOR_FILE defines the vector file name, and the environment variable .B SPLICE_FILE defines the splice site file name. Both variables are used when the user does not specify them using the .B -vector option. .SH "SEE ALSO" TIGR_Assembler(1), grim(1), everm.sp(1), phred(1), TraceTuner(1), and ethyl.pl(1). .SH BUGS No known bugs for the program at this moment. Some of the manual pages mentioned above do not exist. .SH CAVEATS The "no bugs" claim above can never be true. This is a new program built mostly from scratch, and there must be bugs somewhere, somehow. Please direct all bug reports to the authors. .SH ACRONYM .I Lucy stands for .B Less Useful Chunks Yank, an awkward combination of words in order to make it a member of the family with phred, the base caller, ethyl, the old scripting system lucy replaced, and ricky, the database linking and communication driving software of lucy for use in TIGR. .SH AUTHOR .I Lucy was written by Hui-Hsien Chou and Michael Holmes at The Institute for Genomic Research, with help and suggestions from Granger Sutton, Anna Glodek, John Scott, and Terry Shea. Michael Holmes is currently responsible for .I lucy. Please direct any suggestions, bug reports, etc. to mholmes@tigr.org. lucy-1.20p/lucy.c0000640000245300000770000010102311057551460013102 0ustar mholmestigr/**************************************************************************** * * Copyright (c) 2003, The Institute for Genomic Research (TIGR), Rockville, * Maryland, U.S.A. All rights reserved. * ****************************************************************************/ #include #include #include #include #include #define TABLE_LENGTH 1023 #define BUFFER_LENGTH 4096 #define REPORT_FREQUENCY 50 #define RANGES 3 /* maximum number of splice sequences in splice file */ #define MAX_SPLICE_SEQS 40 #define newstring(len, str) (strcpy(malloc(sizeof(char)*(len)), (str))) typedef struct seq_struct { char *name; struct seq_struct *next; long spos, qpos; int len, left, right; struct range_struct { int left, right; } CLN, CLZ, CLB, CLV; } Seq; static int convert[128]={ -1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1, -1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1, -1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,15,-1,-1, -1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1, /* @ A B C D E F G H I J K L M N O P Q R S T U V W X Y Z */ -1, 0,14, 1,11,-1,-1, 2,12,-1,-1,10,-1, 7,15,-1, -1,-1, 5, 9, 3, 4,13, 8,15, 6,-1,-1,-1,-1,-1,-1, -1, 0,14, 1,11,-1,-1, 2,12,-1,-1,10,-1, 7,15,-1, -1,-1, 5, 9, 3, 4,13, 8,15, 6,-1,-1,-1,-1,-1,-1}; /* variables defined in qual_trim.c */ #define MAX_NUMBER_OF_WINDOWS 20 extern int *conf_val_raw; extern int num_windows, windows[]; extern double err_limits[], max_avg_error, end_limit; /* variables defined in abi.c */ extern struct abi_struct { unsigned tag; int index; } *abi_well; extern struct hit_struct { int diff, count; } *hit_well; /* variables defined in vector.c */ extern int tag_size; /* variables defined in splice.c */ #define MAXIMUM_THREADS 32 extern int *splice_match_base; extern int *splice_score_pool[]; extern char *splice_direc_pool[]; /* variables defined in poly.c */ extern int cdna, cerr, crng, keep; static char *program_name; void giveup(msg) char *msg; { fprintf(stderr, "%s: %s\n", program_name, msg); fprintf(stderr, "usage: %s\n" " [-pass_along min_value max_value med_value]\n" " [-range area1 area2 area3] [-alignment area1 area2 area3]\n" " [-vector vector_sequence_file splice_site_file]\n" " [-cdna [minimum_span maximum_error initial_search_range]] [-keep]\n" " [-size vector_tag_size] [-threshold vector_cutoff]\n" " [-minimum good_sequence_length] [-debug [filename]]\n" " [-output sequence_filename quality_filename]\n" " [-error max_avg_error max_error_at_ends]\n" " [-window window_size max_avg_error [window_size max_avg_error ...]]\n" " [-bracket window_size max_avg_error]\n" " [-quiet] [-inform_me] [-xtra cpu_threads]\n" " sequence_file quality_file [2nd_sequence_file]\n\n" "For more information try 'man -F lucy'.\n", program_name); exit(99); } void complain(msg) char *msg; { fprintf(stderr, "%s: %s\n", program_name, msg); } unsigned int hashstring(s) unsigned char *s; { register unsigned int value, g; register unsigned char *ptr; value=0; ptr = s; while (*ptr) { value = (value << 4) + *ptr; if (g = value&0xF0000000) { value = value ^ (g>>24); value = value ^ g; } ptr++; } return value; } static Seq *table[TABLE_LENGTH]; Seq *lookup(s) char *s; { register Seq *slot; slot = table[hashstring(s)%TABLE_LENGTH]; while (slot != NULL) { if (strcmp(s, slot->name)==0) return slot; else slot = slot->next; } return slot; } void insert(ptr) Seq *ptr; { register int i; i = hashstring(ptr->name)%TABLE_LENGTH; ptr->next=table[i]; table[i] = ptr; } /* thread related variables */ pthread_mutex_t job_lock, acc_lock; pthread_cond_t job_waiting, job_returning, job_done; int thread_count, job_count, job_close, shutdown, *jobs, job_todo, job_pool; pthread_t *threads; void (*work)(); int assign_job(id) int id; { pthread_mutex_lock(&job_lock); job_todo=id; job_count++; pthread_cond_signal(&job_waiting); while (job_pool<0) pthread_cond_wait(&job_returning, &job_lock); id=job_pool; job_pool=-1; pthread_mutex_unlock(&job_lock); return id; } void *worker(arg) void *arg; { int id=(int)arg; pthread_mutex_lock(&job_lock); while (1) { while (job_todo<0 && !shutdown) pthread_cond_wait(&job_waiting, &job_lock); if (shutdown) { pthread_mutex_unlock(&job_lock); pthread_exit(NULL); } job_pool=id; id=job_todo; job_todo=-1; pthread_cond_signal(&job_returning); pthread_mutex_unlock(&job_lock); (*work)(id); pthread_mutex_lock(&job_lock); job_count--; if (job_close && job_count<=0) pthread_cond_signal(&job_done); } } Seq *seqs; int acc, splice_seqs, first, match[RANGES], range[RANGES], minimum, splice_bases[MAX_SPLICE_SEQS]; char *target_seq[MAXIMUM_THREADS+1], *splice_seq[MAX_SPLICE_SEQS]; void work_splice(id) int id; { int i, j, left, right, shift, saved; i=jobs[id]; for (j=0; jfirst ? first : seqs[i].len, splice_seq[j], splice_bases[j], 0, first, &right); if (seqs[i].left>first) { shift = seqs[i].left; splice_align_left(id, target_seq[id]+shift-match[RANGES-1], (seqs[i].len>shift+range[RANGES-1]) ? (range[RANGES-1]+match[RANGES-1]) : (seqs[i].len-shift+match[RANGES-1]), splice_seq[j], splice_bases[j], shift-match[RANGES-1], seqs[i].left, &saved); if (saved>right) right=saved; shift += range[RANGES-1]; } else if (right<0 && seqs[i].len>first) { shift = first; splice_align_left(id, target_seq[id]+shift-match[RANGES-1], (seqs[i].len>shift+range[RANGES-1]) ? (range[RANGES-1]+match[RANGES-1]) : (seqs[i].len-shift+match[RANGES-1]), splice_seq[j], splice_bases[j], shift-match[RANGES-1], seqs[i].left, &right); shift += range[RANGES-1]; } else shift = first; for (; right+1>=shift && seqs[i].len>shift; shift+=range[RANGES-1]) { splice_align_left(id, target_seq[id]+shift-match[RANGES-1], (seqs[i].len>shift+range[RANGES-1]) ? (range[RANGES-1]+match[RANGES-1]) : (seqs[i].len-shift+match[RANGES-1]), splice_seq[j], splice_bases[j], shift-match[RANGES-1], shift, &saved); if (saved>right) right=saved; } if (right>=0) { if (right+2>seqs[i].CLV.left) seqs[i].CLV.left=right+2; if (right>=seqs[i].left) seqs[i].left=right+1; } if (seqs[i].left<=seqs[i].right-minimum) { splice_align_right(id, target_seq[id]+seqs[i].left, seqs[i].right-seqs[i].left+1, splice_seq[j+1], splice_bases[j+1], seqs[i].left, match[RANGES-1], &left); if (left<0 && seqs[i].right=seqs[i].len) right=seqs[i].len-1; splice_align_right(id, target_seq[id]+left, right-left+1, splice_seq[j+1], splice_bases[j+1], left, match[RANGES-1], &left); } if (left>=0) { if (seqs[i].CLV.right<=0 || left=MAX_NUMBER_OF_WINDOWS) giveup("maximum number of -window option pairs exceeded"); windows[num_windows]=atoi(argv[++i]); if (windows[num_windows]<=0) giveup("invalid window size for -window options"); if (num_windows && windows[num_windows]>windows[num_windows-1]) giveup("sizes must be in decreasing order for -window options"); if (!isdigit(argv[i+1][0]) && argv[i+1][0]!='.') giveup("incorrect number of -window options"); err_limits[num_windows]=atof(argv[++i]); if (err_limits[num_windows]>1.0||err_limits[num_windows]<0.0) giveup("invalid probability values for -window options"); } if (num_windows<=0) giveup("incorrect number of -window options"); break; case 'e': if ((i+2)1.0 || max_avg_error<0.0 || end_limit>1.0 || end_limit<0.0) giveup("invalid probability values for -error options"); } else giveup("incorrect number of -error options"); break; case 'b': if ((i+2)1.0 || bracket_err<0.0 || bracket_size<=0) giveup("invalid values for -bracket option"); } else giveup("incorrect number of -bracket options"); set_bracket(bracket_size, bracket_err); break; case 'p': if ((i+3)16 || tag_size<8) giveup("invalid tag size; must be between 8 to 16"); break; case 't': if ((i+1)MAXIMUM_THREADS || thread_count<1) giveup("invalid thread_count; must be between 1 to 32."); break; default: sprintf(buf, "unknown option %s", argv[i]); giveup(buf); } else if (seq_name==NULL) seq_name=argv[i]; else if (qul_name==NULL) qul_name=argv[i]; else if (abi_name==NULL) abi_name=argv[i]; else giveup("extraneous file names"); if (num_windows == 0) { /* set up default windows for quality trimming */ default_windows(); } if (verbose) { fprintf(stderr, "Less Useful Chunks Yank (lucy) 1.20p, by Hui-Hsien Chou and Michael Holmes,\n"); fprintf(stderr, " with help from Granger, Anna, John and Terry Shea.\n"); } /******************************************************/ /* Phase 0.2: done with parsing, check required files */ /******************************************************/ if (seq_name==NULL) giveup("no input sequence file"); else if ((seq_file=fopen(seq_name, "r"))==NULL) giveup("error opening input sequence file"); if (qul_name==NULL) giveup("no input quality file"); else if ((qul_file=fopen(qul_name, "r"))==NULL) giveup("error opening input quality value file"); if (abi_name && (abi_file=fopen(abi_name, "r"))==NULL) giveup("error opening 2nd sequence file"); if (vec_name==NULL) vec_name=getenv("VECTOR_FILE"); if (vec_name) { if ((vec_file=fopen(vec_name, "r"))==NULL) giveup("error opening vector sequence file"); } else complain("Warning! No vector file given;" " vector removal will not be done!"); if (spl_name==NULL) spl_name=getenv("SPLICE_FILE"); if (spl_name) { if ((spl_file=fopen(spl_name, "r"))==NULL) giveup("error opening splice site file"); } else complain("Warning! No splice file given;" " splice site will not be trimmed!"); /******************************************************/ /* Phase 0.3: spin off extra computing threads */ /******************************************************/ threads=(pthread_t*)malloc(sizeof(pthread_t)*thread_count); jobs=(int*)malloc(sizeof(int)*(thread_count+1)); job_count=job_close=shutdown=0; job_todo=job_pool=-1; id=thread_count; if (pthread_mutex_init(&job_lock, NULL)) giveup("can't initialize thread mutex job_lock"); if (pthread_mutex_init(&acc_lock, NULL)) giveup("can't initialize thread mutex acc_lock"); if (pthread_cond_init(&job_waiting, NULL)) giveup("can't initialize thread condition job_waiting"); if (pthread_cond_init(&job_returning, NULL)) giveup("can't initialize thread condition job_returning"); if (pthread_cond_init(&job_done, NULL)) giveup("can't initialize thread condition job_done"); for (i=0; i' && !isspace(buf[1])) { count++; if (verbose && count%REPORT_FREQUENCY==0) fprintf(stderr, "%d\r", count); } if (count<=0) giveup("input sequence file has no sequence data"); if (verbose) fprintf(stderr, " %d input sequences found.\n", count); /* allocate sequence array for information gathering */ seqs=(Seq*)calloc(count, sizeof(Seq)); /*********************************************************************/ /* Phase 2: read sequence name, length and file position information */ /*********************************************************************/ if (verbose) fprintf(stderr, "Phase 2: Reading sequence name, length and position data...\n"); /* initial value of max_bases is the sum of the alignment ranges */ for (i=max_bases=0; i%s in input sequence file", seqs[i].name); giveup(buf); } insert(&seqs[i]); seqs[i].spos=ftell(seq_file); seqs[i].qpos=-1; for (bases=0; fgets(buf, BUFFER_LENGTH, seq_file) && buf[0]!='>'; ) { for (j=0; buf[j] && !isspace(buf[j]); j++) if (convert[buf[j]&0x7F]<0) { sprintf(buf, "invalid character %c for >%s in sequence file", buf[j], seqs[i].name); giveup(buf); } bases+=j; } if ((seqs[i].len=bases)<=0) acc++; if (bases>max_bases) max_bases=bases; if (verbose && i%REPORT_FREQUENCY==0) fprintf(stderr, "%d\r", i); } if (verbose) fprintf(stderr, " %d empty sequences discarded.\n", acc); /**********************************************************/ /* Phase 3: determine good quality range based on average */ /* probability of error. */ /**********************************************************/ /* allocate appropriate data structures for grim.c/range() */ conf_val_raw=(int*)malloc(sizeof(int)*max_bases); /* read in quality values, determine clear range for each sequence */ if (verbose) fprintf(stderr, "Phase 3: Reading quality values and checking good" " sequence regions...\n"); while ((tmp=fgets(buf, BUFFER_LENGTH, qul_file)) && buf[0]!='>') ; for (title=i=acc=0; tmp; i++) { for (j=1; buf[j] && !isspace(buf[j]); j++) ; buf[j]='\0'; if ((ptr=lookup(&buf[1]))==NULL) { if (title==0) { complain("the quality inputs below (except dropped) " "have no counterpart in the sequence file"); title=1; } complain(buf); while ((tmp=fgets(buf, BUFFER_LENGTH, qul_file)) && buf[0]!='>') ; continue; } ptr->qpos=ftell(qul_file); for (j=0; jlen; j++) if (fscanf(qul_file, "%d", &conf_val_raw[j])!=1) { sprintf(buf, "invalid/mismatch quality input for sequence >%s", ptr->name); giveup(buf); } if (j) fgets(buf, BUFFER_LENGTH, qul_file); if ((tmp=fgets(buf, BUFFER_LENGTH, qul_file)) && buf[0]!='>') { sprintf(buf, "invalid/mismatch quality input for sequence >%s", ptr->name); giveup(buf); } if (j) { /* trim the sequence (determine clean range based on quality) */ quality_trim(conf_val_raw, j, minimum, &(ptr->left), &(ptr->right)); if (ptr->left>=ptr->right) { ptr->CLN.left=0; ptr->CLN.right=0; acc++; if (verbose && inform) { sprintf(buf2, "==> dropping %s", ptr->name); complain(buf2); } } else { ptr->CLN.left=ptr->left+1; ptr->CLN.right=ptr->right+1; } } if (verbose && i%REPORT_FREQUENCY==0) fprintf(stderr, "%d\r", i); } if (verbose) fprintf(stderr, " %d quality sequences read; " "%d low quality sequences dropped.\n", i, acc); /* deallocate data structures for grim.c/range() */ free(conf_val_raw); /*******************************************************************/ /* Phase 4: compare Phred base calls to ABI base calls if provided */ /*******************************************************************/ if (abi_file) { if (verbose) fprintf(stderr, "Phase 4: Comparing to 2nd sequence file...\n"); /* allocate arrays for abi.c/abi_align() */ prepare_abi_mask(); phred_seq=(char*)malloc(sizeof(char)*max_bases); abi_well=(struct abi_struct*)malloc(sizeof(struct abi_struct)*max_bases); hit_well=(struct hit_struct*)malloc(sizeof(struct hit_struct)*max_bases); abi_max_bases=max_bases+BUFFER_LENGTH; abi_seq=(char*)malloc(sizeof(char)*abi_max_bases); while ((tmp=fgets(buf, BUFFER_LENGTH, abi_file)) && buf[0]!='>') ; for (saved=title=i=acc=0; tmp; i++) { for (j=1; buf[j] && !isspace(buf[j]); j++) ; buf[j]='\0'; if ((ptr=lookup(&buf[1]))==NULL) { if (title==0) { complain("the 2nd sequences below (except salvaged) " "are not found in the first sequence file"); title=1; } complain(buf); while ((tmp=fgets(buf, BUFFER_LENGTH, abi_file)) && buf[0]!='>') ; continue; } if (ptr->len>0) { fseek(seq_file, ptr->spos, SEEK_SET); for (bases=0; fgets(buf, BUFFER_LENGTH, seq_file) && buf[0]!='>'; ) for (j=0; buf[j] && !isspace(buf[j]); j++) phred_seq[bases++]=convert[buf[j]&0x7F]; if (bases!=ptr->len) giveup("how can bases!=ptr->len happen in Phase 4? " "Report to programmer!"); } for (bases=0; (tmp=fgets(buf, BUFFER_LENGTH, abi_file)) && buf[0]!='>'; ) for (j=0; buf[j] && !isspace(buf[j]); j++) { if (bases>=abi_max_bases) { abi_max_bases += BUFFER_LENGTH; abi_seq=realloc(abi_seq, sizeof(char)*abi_max_bases); } if ((abi_seq[bases++]=convert[buf[j]&0x7F])<0) { sprintf(buf, "invalid character %c for >%s in 2nd sequence file", buf[j], ptr->name); giveup(buf); } } if (ptr->len>0) { abi_align(phred_seq, ptr->len, abi_seq, bases, &left, &right); if (left>=right) { ptr->CLZ.left=0; ptr->CLZ.right=0; } else { ptr->CLZ.left=left+1; ptr->CLZ.right=right+1; } if (right-left>minimum) { if (ptr->left>=ptr->right) { saved++; acc++; ptr->left=left; ptr->right=right; if (verbose && inform) { sprintf(buf2, "<== saving %s", ptr->name); complain(buf2); } } else if (leftleft) { ptr->left=left; acc++; if (right>ptr->right) ptr->right=right; } else if (right>ptr->right) { ptr->right=right; acc++; } } } if (verbose && i%REPORT_FREQUENCY==0) fprintf(stderr, "%d\r", i); } if (verbose) fprintf(stderr, " %d 2nd sequences compared;" " %d sequences extended.\n", i, acc); if (verbose && saved) fprintf(stderr, " %d low quality sequences salvaged.\n", saved); /* deallocate dynamic programming matrix for abi.c/abi_align() */ free(abi_seq); free(hit_well); free(abi_well); free(phred_seq); } else if (verbose) fprintf(stderr, "Phase 4: 2nd sequences comparsion skipped...\n" " no 2nd sequence file provided.\n"); /* update CLB information */ for (i=0; i=seqs[i].right) { seqs[i].CLB.left=0; seqs[i].CLB.right=0; } else { seqs[i].CLB.left=seqs[i].left+1; seqs[i].CLB.right=seqs[i].right+1; } } /***********************************************/ /* Phase 5: locate splice sites on sequences */ /***********************************************/ if (spl_file) { if (verbose) fprintf(stderr, "Phase 5: Locating splice sites..."); /* making match array */ for (i=bases=0; i0) pthread_cond_wait(&job_done, &job_lock); job_close=0; pthread_mutex_unlock(&job_lock); if (verbose) fprintf(stderr, " %d short or no insert sequences discarded.\n", acc); for (i=thread_count; i>=0; i--) { free(splice_direc_pool[i]); free(splice_score_pool[i]); free(target_seq[i]); } for (i=splice_seqs-1; i>=0; i--) free(splice_seq[i]); free(splice_match_base); } /*************************************************/ /* Phase 5a: identify poly-A/T ends on sequences */ /*************************************************/ if (cdna) { if (verbose) fprintf(stderr, "Phase 5a: Identifying Poly-A/T ends...\n"); /* identifying poly-A/T ends for each sequence */ phred_seq=(char*)malloc(sizeof(char)*max_bases); for (i=acc=0; ilen happen in Phase 6?" " Report to programmer!"); bases=seqs[i].right-seqs[i].left+1; j=match_vector_tags(phred_seq+seqs[i].left, bases); if (bases-jthreshold) { seqs[i].left=seqs[i].right=0; acc++; } } if (verbose && i%REPORT_FREQUENCY==0) fprintf(stderr, "%d\r", i); } if (verbose) fprintf(stderr, " %d vector sequences discarded.\n", acc); free(phred_seq); destroy_vector_tags(); } /******************************************************/ /* Phase 7: produce output sequence and quality files */ /******************************************************/ if (verbose) fprintf(stderr, "Phase 7: Producing output sequence and quality files...\n"); seq_out=fopen(seq_out_name, "w"); qul_out=fopen(qul_out_name, "w"); for (title=i=acc=0; i%s", seqs[i].name); complain(buf); } else if (seqs[i].left < seqs[i].right) { sprintf(buf, ">%s %d %d %d %d %d\n", seqs[i].name, c_min, c_max, c_med, seqs[i].left+1, seqs[i].right+1); fputs(buf, seq_out); sprintf(buf, ">%s\n", seqs[i].name); fputs(buf, qul_out); fseek(seq_file, seqs[i].spos, SEEK_SET); while (fgets(buf, BUFFER_LENGTH, seq_file) && buf[0]!='>') fputs(buf, seq_out); fseek(qul_file, seqs[i].qpos, SEEK_SET); while (fgets(buf, BUFFER_LENGTH, qul_file) && buf[0]!='>') fputs(buf, qul_out); acc++; } if (verbose && i%REPORT_FREQUENCY==0) fprintf(stderr, "%d\r", i); } if (verbose) fprintf(stderr, " %d good sequences written in" " %s and %s.\n", acc, seq_out_name, qul_out_name); fclose(seq_out); fclose(qul_out); if (debug) { debug_file=fopen(debug_file_name, "w"); for (i=0; i2.5 G(ssembly Sequence Cleanup Program)-2.5 E F1(SYNOPSIS)72 112.8 Q F2 (lucy)108 124.8 Q F0([-pass_along min_v)2.5 E(alue max_v)-.25 E (alue med_v)-.25 E(alue])-.25 E ([-range area1 area2 area3] [-alignment area1 area2 area3])108 136.8 Q ([-v)108 148.8 Q(ector v)-.15 E (ector_sequence_\214le splice_site_\214le])-.15 E ([-cdna [minimum_span maximum_error initial_search_range]] [-k)108 160.8 Q(eep])-.1 E([-size v)108 172.8 Q(ector_tag_size] [-threshold v)-.15 E (ector_cutof)-.15 E(f])-.25 E([-minimum good_sequence_length] [-deb)108 184.8 Q(ug [\214lename]])-.2 E ([-output sequence_\214lename quality_\214lename])108 196.8 Q ([-error max_a)108 208.8 Q(vg_error max_error_at_ends])-.2 E([-windo)108 220.8 Q 2.5(ww)-.25 G(indo)-2.5 E(w_size max_a)-.25 E(vg_error)-.2 E ([windo)118 232.8 Q(w_size max_a)-.25 E(vg_error ...]])-.2 E([-brack)108 244.8 Q(et windo)-.1 E(w_size max_a)-.25 E(vg_error])-.2 E ([-quiet] [-inform_me] [-xtra cpu_threads])108 256.8 Q F2 (sequence_\214le quality_\214le [2nd_sequence_\214le])108 268.8 Q F1 (DESCRIPTION)72 285.6 Q/F3 10/Times-Italic@0 SF(Lucy)108 297.6 Q F0 1.586(is a utility that prepares ra)4.086 F 4.085(wD)-.15 G 2.285 -.35 (NA s)-4.085 H 1.585(equence fragments for sequence assembly).35 F 4.085 (,p)-.65 G 1.585(ossibly using the)-4.085 F F3 1.252(TIGR Assembler)108 309.6 R(.)-1.11 E F0(Ra)6.252 E 3.752(wD)-.15 G 1.952 -.35(NA s)-3.752 H 1.252(equence fragments are obtained from DN).35 F 3.753(As)-.35 G 1.253 (equencing machines, such as)-3.753 F .58 (those from the Applied Biosystems Inc. \(ABI\).)108 321.6 R F3(Lucy) 5.579 E F0 .579(accepts three input data \214les: the)3.079 F F2 .579 (sequences \214le,)3.079 F F0(the)3.079 E F2 .681(quality \214le,)108 333.6 R F0 .682(and \(optionally\) a)3.181 F F2 .682 (second sequence \214le)3.182 F F0 .682 (for comparison purposes. All three \214les should be in)3.182 F (the plain F)108 345.6 Q(AST)-.74 E 2.5(Af)-.93 G(ormat.)-2.5 E .711 (The \214rst sequence \214le and its accompan)108 362.4 R .71 (ying quality \214le are obtained from other utility programs, such as) -.15 F F3(phr)108 374.4 Q(ed\(1\),)-.37 E F0 .233(which reads the seque\ ncing machine chromatograph outputs and generates sequence base calls i\ n)2.733 F 4.731(as)108 386.4 S 2.231(equence \214le together with a qua\ lity assessment \214le for each base call made. The optional second) -4.731 F .785(sequence \214le usually comes directly from the sequencin\ g machine itself and are used to reassure/enhance)108 398.4 R (the quality of the sequences.)108 410.4 Q F3(Lucy)108 427.2 Q F0(mak) 3.408 E .907(es no assumption about the order of sequences in the three\ input \214les. As long as all necessary)-.1 F 1.421 (information can be found, DN)108 439.2 R 3.921(As)-.35 G 1.421 (equences and quality sequences can be in dif)-3.921 F 1.422 (ferent order)-.25 F 3.922(.As)-.55 G(equence)-3.922 E .747 (without its quality assessment companion or vice v)108 451.2 R .747 (ersa will be reported as an error)-.15 F 3.247(.T)-.55 G .746 (he second sequence)-3.247 F .581(\214le is allo)108 463.2 R .581 (wed to ha)-.25 F .882 -.15(ve m)-.2 H .582(issing sequences that appea\ r only in the \214rst sequence \214le. Sequences that appear).15 F (only in the second sequence \214le will be reported and ignored by)108 475.2 Q F3(lucy)2.5 E(.)-.55 E F0(The operations of)108 492 Q F3(Lucy) 2.5 E F0(are di)2.5 E(vided into 7 phases:)-.25 E F2(Phase 1:)108 508.8 Q F0 .664(Count the number of input sequences in the \214rst sequence \ \214le, and create internal data structures)144 520.8 R(accordingly)144 532.8 Q(.)-.65 E F3(Lucy)5.86 E F0 .86(allocates memory dynamically)3.36 F 3.36(,s)-.65 G 3.36(ot)-3.36 G .86 (here is no preset limit on the size of input)-3.36 F (\214les. The size of input \214les is only limited by your a)144 544.8 Q -.25(va)-.2 G(ilable computer memory).25 E(.)-.65 E 3.454 (Note that luc)144 568.8 R(y')-.15 E 5.953(ss)-.55 G 3.453 (tatic memory requirement gro)-5.953 F 3.453(ws v)-.25 F 3.453(ery slo) -.15 F 3.453(wly with the number of input)-.25 F 1.053(sequences, at ro\ ughly 60 bytes plus the sequence name storage for each input sequence. \ This is)144 580.8 R .02(because luc)144 592.8 R 2.52(yd)-.15 G .02 (oes not store an)-2.52 F 2.519(ys)-.15 G .019 (equence data in the memory after processing them.)-2.519 F .019 (Therefore, by)5.019 F .084(all practical considerations luc)144 604.8 R 2.584(yc)-.15 G .084(an handle an)-2.584 F 2.585(yn)-.15 G .085 (umber of input sequences.)-2.585 F .085(The dynamic memory)5.085 F 2.413(requirement of luc)144 616.8 R 4.913(yi)-.15 G 4.913(sp)-4.913 G 2.413 (roportional to the longest sequence in the input, not the number of) -4.913 F(sequences, b)144 628.8 Q(ut its actual size v)-.2 E (aries from processing phases to phases.)-.25 E F2(Phase 2:)108 645.6 Q F0 .283 (Read all sequence information, including name, length, and positions.) 144 657.6 R 1.883 -.8(To s)5.283 H -2.25 -.2(av e).8 H(memory)2.983 E(,) -.65 E F3(lucy)2.783 E F0(does)2.784 E 1.316(not load all sequences dat\ a into main memory at once. Instead, it uses direct \214le addressing t\ o)144 669.6 R .155 (access each sequence only when it is needed. Therefore, it is v)144 681.6 R .155(ery important that the content of the)-.15 F (input \214les stays unchanged during runtime.)144 693.6 Q(TIGR softw)72 768 Q 148.56(are 10/28/2000)-.1 F(1)206.22 E EP %%Page: 2 2 %%BeginPageSetup BP %%EndPageSetup /F0 10/Times-Roman@0 SF 134.845(LUCY\(1\) Sequence)72 48 R (Assembly Utilities)2.5 E(LUCY\(1\))137.345 E/F1 10/Times-Bold@0 SF (Phase 3:)108 84 Q F0 .232(Read the quality information for sequences, \ and compute good quality re)144 96 R .231(gions, i.e., re)-.15 F .231 (gions within)-.15 F 1.538(sequences that ha)144 108 R 1.838 -.15(ve h) -.2 H 1.538(igher quality v).15 F 1.539 (alues and can be trusted to be correct.)-.25 F/F2 10/Times-Italic@0 SF (Lucy)6.539 E F0 1.539(determines a)4.039 F .016 ("clean" range which has an a)144 120 R -.15(ve)-.2 G .015(rage probabi\ lity of error \(per base\) that is no greater than the proba-).15 F 1.548(bility speci\214ed by the -error option \(or the def)144 132 R 1.549(ault, if -error is not used\).)-.1 F 1.549(Note that secondary) 6.549 F .434(sequence e)144 144 R .434(xtension \(ne)-.15 F .434 (xt step\) is performed after quality trimming.)-.15 F .433 (Because of this, it is possible)5.433 F .318 (that the \214nal "clear" range \(after v)144 156 R .319 (ector trimming\) will ha)-.15 F .619 -.15(ve a p)-.2 H .319 (robability of error which is greater).15 F(than the speci\214ed v)144 168 Q(alue.)-.25 E F1(Phase 4:)108 184.8 Q F0 .878(Read the second sequ\ ence \214le, compare its sequences to the \214rst sequence \214le, and \ e)144 196.8 R .878(xtend good)-.15 F .414(quality re)144 208.8 R .414 (gions if the)-.15 F 2.914(yb)-.15 G .415 (oth agree. If the second sequence \214le is not pro)-2.914 F .415 (vided, this step is skipped.)-.15 F 1.73 (Note that this sequence comparison phase will not in an)144 220.8 R(yw) -.15 E 1.73(ay shorten the good quality re)-.1 F(gion)-.15 E 1.04 (determined by the pre)144 232.8 R 1.04(vious phase; it will only e)-.25 F 1.04(xtend it if possible. It is v)-.15 F 1.04(ery important that the) -.15 F .404(second sequence \214le does)144 244.8 R F2(not)2.904 E F0 .404(come from the same base calling softw)2.904 F .403 (are as the \214rst sequence \214le,)-.1 F .182(and is base-called with) 144 256.8 R F2(dif)2.682 E(fer)-.18 E(ent)-.37 E F0 .182 (algorithms. Otherwise, if the tw)2.682 F 2.682(os)-.1 G .182 (equence \214les are identical,)-2.682 F F2(lucy)2.683 E F0 .828(will e) 144 268.8 R .828(xtend sequences all the w)-.15 F .827 (ay to both ends, and completely ruin the purpose of quality trim-)-.1 F (ming done in the pre)144 280.8 Q(vious phase.)-.25 E(Usually)144 304.8 Q 3.064(,t)-.65 G .564(he \214rst sequence \214le comes from)-3.064 F F2 (phr)3.064 E(ed\(1\))-.37 E F0 .564 (with the companion quality \214le, and the sec-)3.064 F .441(ond seque\ nce \214le comes directly from the original ABI base calling softw)144 316.8 R .44(are with the sequencing)-.1 F(machines.)144 328.8 Q F1 (Phase 5:)108 345.6 Q F0 .741(Chop of)144 357.6 R 3.241(fs)-.25 G .742 (plice sites from the sequences. In this phase,)-3.241 F F2(lucy)3.242 E F0 .742(tries to compare all input sequences)3.242 F(ag)144 369.6 Q .336 (ainst splice site sequences in a splice site \214le which de\214nes th\ e v)-.05 F .335(ector sequences near the inser)-.15 F(-)-.2 E 1.314 (tion point on the v)144 381.6 R(ector)-.15 E 3.814(.I)-.55 G 3.814(fs) -3.814 G 1.314(plice site sequences are found on an)-3.814 F 3.814(yi) -.15 G 1.314(nput sequence, the)-3.814 F 3.815(yw)-.15 G 1.315(ill be) -3.815 F -.15(ex)144 393.6 S .302(cluded from the good quality re).15 F .301(gion so that the sequence assembly program will not mistak)-.15 F (enly)-.1 E(tak)144 405.6 Q 2.984(et)-.1 G .485 (hem into account when trying to reassemble the sequences. Note that) -2.984 F F2(lucy)2.985 E F0 .485(assumes all input)2.985 F .036(sequenc\ es are read from the same direction and matching the direction of the s\ plice site sequences.)144 417.6 R 1.03(Therefore, the forw)144 429.6 R 1.03(ard and re)-.1 F -.15(ve)-.25 G 1.031 (rse read sequences of a clone should not be mix).15 F 1.031 (ed together in a)-.15 F .438 (single input \214le. If such a mixture of forw)144 441.6 R .437 (ard and re)-.1 F -.15(ve)-.25 G .437(rse read sequences is una).15 F -.2(vo)-.2 G(idable,).2 E F2(lucy)2.937 E F0(can)2.937 E 1.219 (be run twice to check in both directions, once with the forw)144 453.6 R 1.22(ard splice site sequences, the other)-.1 F .548(time with the re) 144 465.6 R -.15(ve)-.25 G .548(rse splice site sequences.).15 F .548 (See the description of option)5.548 F F1(-v)3.048 E(ector)-.1 E F0 (belo)3.048 E 3.048(wf)-.25 G .548(or more)-3.048 F(details.)144 477.6 Q .638(By popular demand, a poly-A/T trimming feature has been b)144 501.6 R .638(uilt into)-.2 F F2(lucy)3.138 E(.)-.55 E F0 .638 (It is designated Phase)5.638 F (5a and is an optional step. See the options)144 513.6 Q F1(-cdna)2.5 E F0(and)2.5 E F1(-k)2.5 E(eep)-.1 E F0(belo)2.5 E 2.5(wf)-.25 G (or details of their usage.)-2.5 E F1(Phase 6:)108 530.4 Q F0(Remo)144 542.4 Q 2.246 -.15(ve ve)-.15 H 1.946 (ctor insert sequences. In this phase, all input sequences are check).15 F 1.945(ed ag)-.1 F 1.945(ainst a full)-.05 F 1.149(length v)144 554.4 R 1.149(ector sequence in a v)-.15 F 1.149 (ector \214le, and sequences that are v)-.15 F 1.15 (ector inserts themselv)-.15 F 1.15(es will be)-.15 F .647 (detected and remo)144 566.4 R -.15(ve)-.15 G(d.).15 E F2(Lucy)5.647 E F0 .646(uses a quick fragment match method to check for v)3.147 F .646 (ector sequences.)-.15 F .419(Both the tar)144 578.4 R .419(get v)-.18 F .419(ector sequence and the input sequences are con)-.15 F -.15(ve)-.4 G .42(rted into fragments \(range from).15 F 3.03(8t)144 590.4 S 3.03(o1) -3.03 G 3.03(6b)-3.03 G .53(ases long, def)-3.03 F .529 (ault is 10\), and matching fragments are detected quickly)-.1 F 3.029 (.V)-.65 G .529(ector sequences)-4.139 F 1.577(are detected when the)144 602.4 R 4.077(yc)-.15 G 1.577(ontain more matches to v)-4.077 F 1.577 (ector fragments in their good quality re)-.15 F(gion)-.15 E 1.18 (\(already e)144 614.4 R 1.179 (xcluded of splice site sequences done pre)-.15 F 1.179 (viously\) than a normal, non-v)-.25 F 1.179(ector sequence)-.15 F 1.133 (can possibly match by chance. The def)144 626.4 R 1.134(ault cutof)-.1 F 3.634(ft)-.25 G 1.134(hreshold is 20%. A sequence which contains) -3.634 F -.15(ove)144 638.4 S 2.5(r2).15 G(0% match to the v)-2.5 E (ector will be considered a v)-.15 E(ector insert and discarded.)-.15 E F1(Phase 7:)108 655.2 Q F0 1.4 (Produce output sequences for fragment assembly)144 667.2 R 3.9(.I)-.65 G 3.9(nt)-3.9 G 1.4(he \214nal phase,)-3.9 F F2(Lucy)3.9 E F0 1.4 (produces tw)3.9 F 3.9(oo)-.1 G(utput)-3.9 E 1.244 (\214les, the cleaned sequence \214le with mark)144 679.2 R 1.244 (ers for good quality re)-.1 F 1.245(gions, and a companion quality)-.15 F 1.475(\214le. Optionally)144 691.2 R(,)-.65 E F2(lucy)3.975 E F0 1.475 (can also generate a clea)3.975 F -.25(va)-.2 G 1.475 (ge information \214le \(i.e. the good quality re).25 F(gion)-.15 E (information\) which can be used to update database.)144 703.2 Q 1.274 (Each sequence in the output sequence \214le be)108 720 R 1.275 (gins with a header that includes its name, three pass along)-.15 F (TIGR softw)72 768 Q 148.56(are 10/28/2000)-.1 F(2)206.22 E EP %%Page: 3 3 %%BeginPageSetup BP %%EndPageSetup /F0 10/Times-Roman@0 SF 134.845(LUCY\(1\) Sequence)72 48 R (Assembly Utilities)2.5 E(LUCY\(1\))137.345 E .609(clone length v)108 84 R .609 (alues to the fragment assembly program, and a left and right mark)-.25 F .608(er denoting the be)-.1 F .608(gin and)-.15 F(end of the)108 96 Q /F1 10/Times-Bold@0 SF(good)2.5 E F0(quality)2.5 E 2.5(,v)-.65 G (ector free re)-2.65 E 2.5(gion. The)-.15 F(follo)2.5 E(wing is an e) -.25 E(xample of)-.15 E/F2 10/Times-Italic@0 SF(lucy)2.5 E F0(output:) 2.5 E(>GCCAA03TF 1500 3000 2000 43 490)108 112.8 Q -.4(AG)108 124.8 S (CCAA).4 E(GTTTGCA)-.4 E(GCCCTGCA)-.4 E(GGTCGA)-.4 E(CTCT)-.4 E -.4(AG) -.93 G -.4(AG).4 G(GA).4 E(TCCCCA)-1.11 E(GGA)-.4 E(TGA)-1.11 E(TCA) -1.11 E(GCCA)-.4 E(CA)-.4 E(TT)-1.11 E(GGGA)108 136.8 Q(CTGA)-.4 E(GA) -.4 E(CA)-.4 E(CGGCCCAAA)-.4 E(CTCCT)-.4 E -.4(AC)-.93 G(GGGA).4 E(GGCA) -.4 E(GCA)-.4 E(GTGGGGAA)-.4 E(TCTTGCGCAA)-1.11 E(TGG)-1.11 E(GCGAAA)108 148.8 Q(GCCTGA)-.4 E(CGCA)-.4 E(GCCA)-.4 E(TGCCGCGTGAA)-1.11 E(TGA)-1.11 E(TGAA)-1.11 E(GGTCTT)-.4 E -.4(AG)-.93 G(GA).4 E(TTGT)-1.11 E(AAAA)-.93 E(TTCT)-1.11 E(TTCA)108 160.8 Q(CCGGGGA)-.4 E(CGA)-.4 E -.93(TA)-1.11 G -1.11(AT).93 G(GA)1.11 E(CGGT)-.4 E -.4(AC)-.93 G(CCGGA).4 E(GAA)-.4 E (GAA)-.4 E(GCCCCGGCT)-.4 E(AA)-.93 E(CTTCGTGCCA)-.4 E(GC)-.4 E(...)118 172.8 Q/F3 9/Times-Bold@0 SF(OPTIONS)72 189.6 Q F0 .018(Note that)108 201.6 R F2(lucy)2.518 E F0 .018 (checks only the \214rst letter of each option, so all options belo) 2.518 F 2.519(wc)-.25 G .019(an be represented by just typ-)-2.519 F (ing the \214rst letter)108 213.6 Q 2.5(,e)-.4 G (.g. -p for -pass_along.)-2.5 E F1(\255pass_along min_v)108 230.4 Q (alue max_v)-.1 E(alue med_v)-.1 E(alue)-.1 E F0 .001 (The three pass along v)144 242.4 R .001 (alues of minimum, maximum and medium clone lengths are gi)-.25 F -.15 (ve)-.25 G 2.5(nu).15 G(sing this)-2.5 E(option.)144 254.4 Q F2(Lucy) 5.322 E F0 .323(does not interpret these v)2.822 F .323(alues; the)-.25 F 2.823(ya)-.15 G .323(re used by some sequence assembly programs,) -2.823 F .998(such as)144 266.4 R F2 .998(TIGR Assembler)3.498 F(.)-1.11 E F0 .998(These v)5.998 F .997(alues are directly copied o)-.25 F -.15 (ve)-.15 G 3.497(rt).15 G 3.497(ot)-3.497 G .997 (he output sequence \214le. The)-3.497 F(def)144 278.4 Q(ault v)-.1 E (alues are 0, 0, and 0.)-.25 E F1(\255range ar)108 295.2 Q(ea1 ar)-.18 E (ea2 ar)-.18 E(ea3)-.18 E F0 1.637 (This option is used in combination with the follo)144 307.2 R 1.637 (wing option)-.25 F F1(-alignment.)4.137 E F0 1.638 (It de\214nes the three)6.637 F .352 (splice site checking areas which may need dif)144 319.2 R .352 (ferent strengths of splice site alignment. The quality)-.25 F .256 (of the base calls is usually poor at the be)144 331.2 R .257 (ginning of a sequence b)-.15 F .257(ut gradually impro)-.2 F -.15(ve) -.15 G 2.757(sw).15 G .257(hen mo)-2.757 F(v-)-.15 E .811(ing into the \ sequence read. Therefore, when looking for splice sites, stronger and s\ tronger align-)144 343.2 R .671 (ment measurements are needed to cope with the quality change. The def) 144 355.2 R .671(ault range v)-.1 F .671(alues are 40,)-.25 F 1.112 (60 and 100, i.e.,)144 367.2 R F2(lucy)3.612 E F0 1.112 (will check for splice sites at the \214rst 200 DN)3.612 F 3.611(Ab)-.35 G 1.111(ases. If splice site is not)-3.611 F 1.167 (found at the \214rst 200 bases, the ne)144 379.2 R 1.168 (xt 100 \(=area3\) bases will be check)-.15 F 1.168 (ed, with a total checking)-.1 F .481(length of 300. Once a splice site\ is found, the rest of the sequence after the splice site is searched) 144 391.2 R(for the other end of the splice site, if an)144 403.2 Q 1.3 -.65(y, t)-.15 H 2.5(og).65 G(uard ag)-2.5 E(ainst short inserts.)-.05 E F1(\255alignment ar)108 420 Q(ea1 ar)-.18 E(ea2 ar)-.18 E(ea3)-.18 E F0 .898(This option is used in combination with the pre)144 432 R .898 (vious option.)-.25 F .898(It de\214nes the three dif)5.898 F .898 (ferent align-)-.25 F 1.161(ment strengths for the three areas. An alig\ nment within each area must be equal or longer than)144 444 R .6 (these v)144 456 R .6 (alues before it is considered a match of the splice site. Def)-.25 F .601(ault v)-.1 F .601(alues are 8, 12 and 16 for)-.25 F (the \214rst 40, 60 and 100 bases, respecti)144 468 Q -.15(ve)-.25 G(ly) .15 E(.)-.65 E F1108 484.8 Q(ector v)-.1 E (ector_sequence_\214le splice_site_\214le)-.1 E F0 .147(This option pro) 144 496.8 R .147(vides the complete v)-.15 F .147 (ector sequence \214le and a partial splice site sequence \214le.)-.15 F F2(Lucy)5.146 E F0 -.15(ex)144 508.8 S .693 (pects to see one single \(probably long\) sequence of the v).15 F .693 (ector that is used to do cloning in the)-.15 F -.15(ve)144 520.8 S .538 (ctor \214le, and).15 F F1(tw)3.037 E(o)-.1 E F0 .537 (splice site sequences)3.037 F F1(bef)3.037 E(or)-.25 E(e)-.18 E F0(and) 3.037 E F1(after)3.037 E F0 .537(the insertion point on the v)3.037 F .537(ector in the)-.15 F .652(splice site \214le. The splice site seque\ nces are usually 150 bases in length, with a 50 bases o)144 532.8 R -.15 (ve)-.15 G(rlay).15 E .482(right around the v)144 544.8 R .481 (ector insertion point. Their actual lengths are not v)-.15 F .481 (ery critical. F)-.15 F .481(or e)-.15 F .481(xample, the)-.15 F(follo) 144 556.8 Q (wings are the PUC18 splice site sequences that can be used by)-.25 E F2 (lucy:)2.5 E F0(>PUCsplice.for)144 580.8 Q(.be)-.55 E(gin)-.15 E -.05 (ga)144 592.8 S(ttaagttgggtaacgccagggttttcccagtcacg).05 E(acgttgtaaaacg) -.05 E(acggccagtgccaagcttgcatgcctgcaggtcg)144 604.8 Q(actctag)-.05 E (agg)-.05 E(atcccc)-.05 E(gggtaccg)144 616.8 Q(agctcg)-.05 E (aattcgtaatcatggtcatagctgtttcctgtgtg)-.05 E(a)-.05 E(>PUCsplice.for)144 628.8 Q(.end)-.55 E(acggccagtgccaagcttgcatgcctgcaggtcg)144 640.8 Q (actctag)-.05 E(agg)-.05 E(atcccc)-.05 E(gggtaccg)144 652.8 Q(agctcg) -.05 E(aattcgtaatcatggtcatagctgtttcctgtgtg)-.05 E(a)-.05 E (aattgttatccgctcacaattccacacaacatacg)144 664.8 Q(agccgg)-.05 E (aagcataaa)-.05 E -.4(Wi)144 688.8 S .012(th tw).4 F 2.512(os)-.1 G .012 (plice site sequences as abo)-2.512 F -.15(ve)-.15 G(,).15 E F2(lucy) 2.512 E F0 .013 (assumes all sequences from the input \214les are read in)2.512 F 2.382 (the same direction as the splice site sequences. If that is not true a\ nd the input consists of)144 700.8 R .836(sequences from both forw)144 712.8 R .837(ard and re)-.1 F -.15(ve)-.25 G .837 (rse reads of a clone, there are tw).15 F 3.337(oo)-.1 G .837 (ptions. One can either)-3.337 F .645(separate the sequences into forw) 144 724.8 R .645(ard and re)-.1 F -.15(ve)-.25 G .645 (rse read sets and run them through).15 F F2(lucy)3.144 E F0 .644 (with correct)3.144 F(TIGR softw)72 768 Q 148.56(are 10/28/2000)-.1 F(3) 206.22 E EP %%Page: 4 4 %%BeginPageSetup BP %%EndPageSetup /F0 10/Times-Roman@0 SF 134.845(LUCY\(1\) Sequence)72 48 R (Assembly Utilities)2.5 E(LUCY\(1\))137.345 E .231 (splice site sequences. One can also run)144 84 R/F1 10/Times-Italic@0 SF(lucy)2.732 E F0 .232(with a combined splice site \214le with)2.732 F /F2 10/Times-Bold@0 SF(both)2.732 E F0 .232(the forw)2.732 F(ard)-.1 E .022(and re)144 96 R -.15(ve)-.25 G .022 (rse splice site sequence pairs. That is, if).15 F F1(lucy)2.522 E F0 .021(sees four splice site sequences, it will assume)2.522 F 1.599 (that a)144 108 R F2(bidir)4.099 E(ectional)-.18 E F0 1.599 (splice site trimming has been ordered. F)4.099 F 1.599(or e)-.15 F 1.6 (xample, the follo)-.15 F 1.6(wing re)-.25 F -.15(ve)-.25 G(rse).15 E 1.098(PUC18 splice site sequences can be appended to the forw)144 120 R 1.098(ard splice sequences abo)-.1 F 1.397 -.15(ve t)-.15 H 3.597(oi).15 G(nstruct)-3.597 E F1(lucy)144 132 Q F0(to do bidirectional trimmings:) 2.5 E(>PUCsplice.re)144 156 Q -.65(v.)-.25 G(be).65 E(gin)-.15 E (tttatgcttccggctcgtatgttgtgtgg)144 168 Q(aattgtg)-.05 E(agcgg)-.05 E (ataacaatt)-.05 E(tcacacagg)144 180 Q(aaacagctatg)-.05 E(accatg)-.05 E (attacg)-.05 E(aattcg)-.05 E(agctcggtaccc)-.05 E(gggg)144 192 Q (atcctctag)-.05 E(agtcg)-.05 E(acctgcaggcatgcaagcttggcactggccgt)-.05 E (>PUCsplice.re)144 204 Q -.65(v.)-.25 G(end).65 E(tcacacagg)144 216 Q (aaacagctatg)-.05 E(accatg)-.05 E(attacg)-.05 E(aattcg)-.05 E (agctcggtaccc)-.05 E(gggg)144 228 Q(atcctctag)-.05 E(agtcg)-.05 E (acctgcaggcatgcaagcttggcactggccgt)-.05 E(cgttttacaacgtcgtg)144 240 Q (actggg)-.05 E(aaaaccctggcgttacccaacttaatc)-.05 E 2.154 (Bidirectional trimmings will run about tw)144 264 R 4.654(ot)-.1 G 2.154(imes slo)-4.654 F 2.154(wer because each sequence is compared)-.25 F(ag)144 276 Q .855(ainst tw)-.05 F 3.355(os)-.1 G .855(ets of splice s\ ite sequences when only one set is actually needed. It is possible that) -3.355 F .37(random alignments with the other \(unneeded\) set will res\ ult in someho)144 288 R 2.87(was)-.25 G .37(hortened good quality)-2.87 F(re)144 300 Q 1.663(gion of a sequence. Ho)-.15 F(we)-.25 E -.15(ve) -.25 G 2.463 -.4(r, b).15 H 1.663 (idirectional trimmings can guarantee that there are no v).4 F(ector) -.15 E .608(fragments in the good quality re)144 312 R .608(gion e)-.15 F -.15(ve)-.25 G 3.108(nw).15 G .608 (hen the assumed direction of some sequence reads is)-3.108 F(wrong.)144 324 Q(During)144 348 Q F2 .686(phase 6)3.186 F F0 .686(contaminant remo) 3.186 F -.25(va)-.15 G(l,).25 E F1(lucy)3.186 E F0 .686 (will automatically re)3.186 F -.15(ve)-.25 G .686 (rse complement the full length).15 F -.15(ve)144 360 S .345 (ctor sequence and check for both its forw).15 F .345(ard and re)-.1 F -.15(ve)-.25 G .345(rse inserts, so only one v).15 F .345 (ector sequence is)-.15 F .346(needed in the v)144 372 R .346 (ector \214le.)-.15 F F1(Lucy)5.346 E F0 .346(can also get the v)2.846 F .345(ector and splice site \214le names from the en)-.15 F(viron-)-.4 E (ment v)144 384 Q(ariables)-.25 E F2(VECT)2.5 E(OR_FILE)-.18 E F0(and) 2.5 E F2(SPLICE_FILE,)2.5 E F0(if the)2.5 E 2.5(ya)-.15 G(re not gi)-2.5 E -.15(ve)-.25 G 2.5(na).15 G 2.5(tt)-2.5 G(he command line.)-2.5 E F2 (\255cdna [minimum_span maximum_err)108 400.8 Q(or initial_sear)-.18 E (ch_range])-.18 E F0 .97(Since the release of)144 412.8 R F1(lucy)3.47 E (,)-.55 E F0(man)3.47 E 3.47(yp)-.15 G .97(eople ha)-3.47 F 1.27 -.15 (ve r)-.2 H .97(equested that a poly-A/T trimming feature be b).15 F (uilt)-.2 E(into)144 424.8 Q F1(lucy)2.654 E F0 .153(for the con)2.654 F -.15(ve)-.4 G .153(nience of people doing cDN).15 F 2.653(As)-.35 G .153 (equencing. This option is added for that pur)-2.653 F(-)-.2 E 1.016 (pose. By def)144 436.8 R(ault)-.1 E F1(lucy)3.516 E F0 1.016 (will not do this step, unless this option is gi)3.516 F -.15(ve)-.25 G 1.016(n. This option can be gi).15 F -.15(ve)-.25 G(n).15 E .081 (alone without an)144 448.8 R 2.581(yp)-.15 G(arameter)-2.581 E 2.581 (,i)-.4 G 2.581(nt)-2.581 G .081(hat case the def)-2.581 F .081(ault v) -.1 F .08(alues will be used, or it can be gi)-.25 F -.15(ve)-.25 G 2.58 (nw).15 G(ith)-2.58 E F2(all)2.58 E F0 1.497(three parameters. The)144 460.8 R F2(minimum_span)3.997 E F0 1.497 (de\214nes the minimum length of)3.997 F F1(continuous)3.998 E F0 1.498 (poly-A or T)3.998 F(before)144 472.8 Q F1(lucy)3.183 E F0(belie)3.183 E -.15(ve)-.25 G 3.183(st).15 G .682(hat it has found them. The)-3.183 F F2(maximum_err)3.182 E(or)-.18 E F0 .682(denotes the maximum number) 3.182 F .996(of errors allo)144 484.8 R .996(wed before a ne)-.25 F 3.496(wc)-.25 G .996(ontinuous poly-A/T re)-3.496 F .997(gion stops.) -.15 F .997(If mismatch error count goes)5.997 F(be)144 496.8 Q .859 (yond maximum_error)-.15 F 3.359(,t)-.4 G(hen)-3.359 E F1(lucy)3.359 E F0(belie)3.359 E -.15(ve)-.25 G 3.359(st).15 G .858 (hat it has reached the end of the poly-A/T tail/head.)-3.359 F .816 (Note that each ne)144 508.8 R 3.316(wc)-.25 G .816 (ontinuous poly-A/T re)-3.316 F .817 (gion that is more than minimum_span long will reset)-.15 F .803 (the error counter to zero, therefore an interlea)144 520.8 R .802 (ving number of maximum_error follo)-.2 F .802(wed by mini-)-.25 F 1.914 (mum_span can k)144 532.8 R 1.914(eep the poly-A/T re)-.1 F 1.914 (gion e)-.15 F 1.914(xpanding. The last parameter)-.15 F F2 (initial_sear)4.414 E(ch_range)-.18 E F0 .349(denotes the range from th\ e ends of a sequence within which a minimum_span number of continu-)144 544.8 R .685(ous poly-A/T')144 556.8 R 3.185(sh)-.55 G -2.25 -.2(av e) -3.185 H .685(to be found, otherwise)3.385 F F1(lucy)3.185 E F0(belie) 3.185 E -.15(ve)-.25 G 3.185(st).15 G .686 (hat it cannot \214nd poly-A/T re)-3.185 F .686(gions for)-.15 F .411(t\ he sequence. Note that the ends of the sequence are related to the clea\ r re)144 568.8 R(gion)-.15 E F2(after)2.91 E F0 -.15(ve)2.91 G .41 (ctor splice).15 F 1.341(sites trimming, not to the actual ph)144 580.8 R 1.341(ysical ends of the sequence. The def)-.05 F 1.342(ault v)-.1 F 1.342(alues of the three)-.25 F 2.628(parameter are minimum_span=10, ma\ ximum_error=3 and initial_search_range=50.)144 592.8 R F2 -.65(Wa)7.628 G -.15(rn).65 G(ing:).15 E F0 .355(these three parameters ha)144 604.8 R .655 -.15(ve t)-.2 H 2.855(ob).15 G 2.855(es)-2.855 G .355 (et carefully in order to a)-2.855 F -.2(vo)-.2 G .355(id thro).2 F .355 (wing good sequences a)-.25 F -.1(wa)-.15 G 2.855(yi).1 G(n)-2.855 E (the middle of a sequence, or to let poly-A/T re)144 616.8 Q (gions slip by at the ends of a sequence.)-.15 E F2108 633.6 Q (eep)-.1 E F0(When)10.4 E F2(-cdna)3.426 E F0 .926(option is turned on,) 3.426 F F1(lucy)3.425 E F0 .925 (will trim all poly-A/T fragments it \214nds. This is good for)3.425 F .832(EST clustering purposes, where you don')144 645.6 R 3.332(tw)-.18 G .832(ant the poly-A/T fragments to stay)-3.432 F 3.332(.H)-.65 G -.25 (ow)-3.332 G -2.15 -.25(ev e).25 H 1.633 -.4(r, i).25 H 3.333(fy).4 G (ou)-3.333 E -.1(wa)144 657.6 S .101 (nt to see the EST sequence in its entirety to kno).1 F 2.601(wi)-.25 G .101(ts direction, it is not helpful to trim poly-A/T)-2.601 F -2.3 -.15 (aw a)144 669.6 T 4.075 -.65(y. T).15 H(he).65 E F2(-k)2.775 E(eep)-.1 E F0 .275(option, when used in combination with the)2.775 F F2(-cdna)2.775 E F0 .276(option, will preserv)2.776 F 2.776(et)-.15 G .276(he poly-) -2.776 F .543(A/T tails/heads at ends of each EST sequence to k)144 681.6 R .542(eep them as tags indicating the direction of the)-.1 F (EST sequence.)144 693.6 Q(TIGR softw)72 768 Q 148.56(are 10/28/2000)-.1 F(4)206.22 E EP %%Page: 5 5 %%BeginPageSetup BP %%EndPageSetup /F0 10/Times-Roman@0 SF 134.845(LUCY\(1\) Sequence)72 48 R (Assembly Utilities)2.5 E(LUCY\(1\))137.345 E/F1 10/Times-Bold@0 SF (\255size v)108 84 Q(ector_tag_size)-.1 E F0 .687 (This option is used in combination with the follo)144 96 R .687 (wing option. It de\214nes the size of fragments for)-.25 F .589 (checking v)144 108 R .589 (ector using the fragment matching algorithm. The def)-.15 F .588 (ault v)-.1 F .588(alue is 10 bases. The range)-.25 F(of acceptable v) 144 120 Q(alues are 8 to 16.)-.25 E F1(\255thr)108 136.8 Q(eshold v)-.18 E(ector_cutoff)-.1 E F0 .787 (The option is used in combination with the pre)144 148.8 R .788 (vious option. It de\214nes the threshold of similarity)-.25 F .279 (between a sequence and the v)144 160.8 R .278 (ector for it to be considered a v)-.15 F .278 (ector insert. Since splice sites are not)-.15 F .212(included in v)144 172.8 R .212(ector screening, an)-.15 F 2.712(ys)-.15 G .213 (equence which has a higher than normal similarity to the v)-2.712 F (ector)-.15 E .109(sequence will be considered a v)144 184.8 R .109 (ector itself and discarded. The def)-.15 F .109(ault v)-.1 F .109 (alue of cutof)-.25 F 2.609(fi)-.25 G 2.608(s2)-2.609 G .108(0% of the) -2.608 F(good quality re)144 196.8 Q(gion.)-.15 E F1 (\255minimum good_sequence_length)108 213.6 Q F0 .526 (After all kinds of checking, comparing and trimming, the good re)144 225.6 R .527(gion of a sequence must still be)-.15 F .169(long enough t\ han the minimum length for it to be considered useful to the sequence a\ ssembly pro-)144 237.6 R .275(gram. W)144 249.6 R 2.775(ed)-.8 G 2.775 (on)-2.775 G .275(ot w)-2.775 F .275 (ant our sequence assembly program to be bothered by man)-.1 F 2.775(ys) -.15 G .275(mall, trash)-2.775 F 2.775(yf)-.05 G(rag-)-2.775 E (ments. The def)144 261.6 Q (ault minimum good sequence length is 100 bases.)-.1 E F1(\255deb)108 278.4 Q(ug [\214lename])-.2 E F0 .122(This option, if gi)144 290.4 R -.15(ve)-.25 G .122(n, tells).15 F/F2 10/Times-Italic@0 SF(lucy)2.622 E F0 .122(to produce a sequence clea)2.622 F -.25(va)-.2 G .122 (ge information \214le for reference or for).25 F .092 (updating the database. The def)144 302.4 R .092 (ault \214le name is "luc)-.1 F -.65(y.)-.15 G(deb).65 E .092 (ug", which can be o)-.2 F -.15(ve)-.15 G .092(rridden by the gi).15 F -.15(ve)-.25 G(n).15 E(\214le name.)144 314.4 Q F1 (\255output sequence_\214lename quality_\214lename)108 331.2 Q F0 .305(\ This option de\214nes the output sequence and quality \214le names. If \ not gi)144 343.2 R -.15(ve)-.25 G .304(n, the def).15 F .304 (ault \214le names)-.1 F F2(lucy)144 355.2 Q F0(uses are "luc)2.5 E -.65 (y.)-.15 G(seq" and "luc).65 E -.65(y.)-.15 G(qul".).65 E F1(\255err)108 372 Q(or max_a)-.18 E(vg_err)-.25 E(or max_err)-.18 E(or_at_ends)-.18 E F0 .185(There are three main steps in the quality trimming performed by) 144 384 R F2(lucy)2.686 E(.)-.55 E F0 .186(The \214rst in)5.186 F -.2 (vo)-.4 G(lv).2 E .186(es remo)-.15 F(ving)-.15 E(lo)144 396 Q 1.829(w-\ quality bases from each end of the sequence, using the criteria speci\ \214ed by the)-.25 F F1(-brack)4.328 E(et)-.1 E F0 3.037(option. The)144 408 R .537(second in)3.037 F -.2(vo)-.4 G(lv).2 E .537(es \214nding re) -.15 F .537(gions of the sequence where the probability of error meets) -.15 F .404(all of the criteria speci\214ed by the)144 420 R F1(-windo) 2.904 E(w)-.1 E F0 2.904(option. After)2.904 F .403(these re)2.903 F .403(gions are found, the third step is)-.15 F .109 (to trim each of them to the lar)144 432 R .109(gest re)-.18 F .109 (gion ha)-.15 F .109(ving an a)-.2 F -.15(ve)-.2 G .11 (rage probability of error no greater than the).15 F(max_a)144 444 Q .035(vg_error speci\214ed by the)-.2 F F1(-err)2.535 E(or)-.18 E F0 2.535(option. Finally)2.535 F 2.535(,t)-.65 G .035(he lar)-2.535 F .035 (gest re)-.18 F .035(gion meeting all of the criteria)-.15 F (is chosen as the \214nal "clean" range.)144 456 Q -1 -.8(Tw o)144 480 T .049(parameters are speci\214ed with this option:)3.349 F(max_a)5.049 E .049(vg_error is the maximum acceptable a)-.2 F -.15(ve)-.2 G(rage).15 E .554(probability of error o)144 492 R -.15(ve)-.15 G 3.054(rt).15 G .554 (he \214nal clean range.)-3.054 F .554 (max_error_at_ends is the maximum probability of)5.554 F .003 (error that is allo)144 504 R .003 (wed for the 2 bases at each end of the \214nal clean range.)-.25 F .004 (The def)5.004 F .004(aults are 0.025 and)-.1 F(0.02, respecti)144 516 Q -.15(ve)-.25 G(ly).15 E 2.5(,i)-.65 G(f)-2.5 E F1(-err)2.5 E(or)-.18 E F0(is not speci\214ed.)2.5 E 3.032(Note: A)144 540 R(base')3.032 E 3.032 (se)-.55 G .531 (stimated probability of error is calculated from the quality v)-3.032 F .531(alue that is assigned)-.25 F(by the base caller)144 552 Q 5(.T)-.55 G(he quality v)-5 E(alue \(Q\) is de\214ned as:)-.25 E 2.5(Q=-)144 576 S (10 * log10\(Probability of error\))-2.5 E F1(\255windo)108 592.8 Q 2.5 (ww)-.1 G(indo)-2.5 E(w_size max_a)-.1 E(vg_err)-.25 E(or [windo)-.18 E (w_size max_a)-.1 E(vg_err)-.25 E(or ...])-.18 E F0 .47(This option af) 144 604.8 R .47(fects the quality trimming of the sequence \(see the de\ scription of the)-.25 F F1(-err)2.97 E(or)-.18 E F0(option,)2.97 E(abo) 144 616.8 Q -.15(ve)-.15 G 3.242(\). It).15 F .742 (speci\214es one or more windo)3.242 F 3.241(ws)-.25 G .741 (izes, and a maximum allo)-3.241 F -.1(wa)-.25 G .741(ble a).1 F -.15 (ve)-.2 G .741(rage probability of).15 F 1.245 (error for each of those windo)144 628.8 R 3.745(ws)-.25 G 3.745 (izes. If)-3.745 F 1.245(more than one windo)3.745 F 3.745(ws)-.25 G 1.246(ize is speci\214ed, the)-3.745 F 3.746(ym)-.15 G 1.246(ust be) -3.746 F 1.342(speci\214ed in decreasing order by windo)144 640.8 R 3.842(ws)-.25 G 3.841(ize. The)-3.842 F 1.341(maximum number of windo) 3.841 F 1.341(ws that may be)-.25 F(speci\214ed is 20.)144 652.8 Q F2 (Lucy)144 676.8 Q F0 1.101(uses a sliding windo)3.601 F 3.601(wa)-.25 G 1.101(lgorithm to \214nd re)-3.601 F 1.102 (gions of the sequence within which the a)-.15 F -.15(ve)-.2 G(rage).15 E 1.958(probability of error)144 688.8 R 4.458(,w)-.4 G 1.958(ithin an) -4.458 F 4.458(yw)-.15 G(indo)-4.458 E 4.457(wo)-.25 G 4.457(ft)-4.457 G 1.957(he speci\214ed size, is no greater than the speci\214ed)-4.457 F (max_a)144 700.8 Q(vg_error)-.2 E 5.794(.R)-.55 G -.15(eg)-5.794 G .794 (ions which meet all of the speci\214ed windo).15 F 3.295(wc)-.25 G .795 (riteria are then trimmed ag)-3.295 F(ain)-.05 E .961 (using the criteria speci\214ed by the)144 712.8 R F1(-err)3.461 E(or) -.18 E F0 .96(option, and the \214nal "clean" range is the lar)3.461 F .96(gest re)-.18 F(gion)-.15 E(that meets all of the criteria.)144 724.8 Q(TIGR softw)72 768 Q 148.56(are 10/28/2000)-.1 F(5)206.22 E EP %%Page: 6 6 %%BeginPageSetup BP %%EndPageSetup /F0 10/Times-Roman@0 SF 134.845(LUCY\(1\) Sequence)72 48 R (Assembly Utilities)2.5 E(LUCY\(1\))137.345 E .746(If the)144 84 R/F1 10 /Times-Bold@0 SF(-windo)3.246 E(w)-.1 E F0 .746 (option is not speci\214ed, then)3.246 F/F2 10/Times-Italic@0 SF(lucy) 3.246 E F0 .746(uses 2 windo)3.246 F .746(ws by def)-.25 F .746 (ault, of 50 and 10 bases.)-.1 F(The def)144 96 Q(ault maximum allo)-.1 E -.1(wa)-.25 G(ble probabilities of error in the tw).1 E 2.5(ow)-.1 G (indo)-2.5 E(ws are listed belo)-.25 E(w:)-.25 E(50-base windo)144 120 Q (w: 0.08)-.25 E(10-base windo)144 132 Q 2.5(w: 0.3)-.25 F F1(\255brack) 108 148.8 Q(et windo)-.1 E(w_size max_a)-.1 E(vg_err)-.25 E(or)-.18 E F0 1.051(This option controls the initial quality trimming step, which is \ the remo)144 160.8 R -.25(va)-.15 G 3.55(lo).25 G 3.55(fl)-3.55 G -.25 (ow)-3.55 G 1.05(-quality bases).25 F .218 (from both ends of the sequence.)144 172.8 R F2(lucy)5.218 E F0 .218 (looks for the \214rst and last windo)2.718 F 2.719(wo)-.25 G 2.719(fs) -2.719 G .219(ize windo)-2.719 F .219(w_size ha)-.25 F(v-)-.2 E 2.545 (ing an a)144 184.8 R -.15(ve)-.2 G 2.545 (rage probability of error no greater than max_a).15 F(vg_error)-.2 E 7.545(.T)-.55 G 2.545(he subsequence which)-7.545 F -.15(ex)144 196.8 S 1.302(tends from the \214rst base of the \214rst such windo).15 F 3.802 (wt)-.25 G 3.802(ot)-3.802 G 1.302(he last base of the last windo)-3.802 F 3.803(wi)-.25 G 3.803(st)-3.803 G(hen)-3.803 E -.15(ex)144 208.8 S .455(amined further to \214nd the clean range.).15 F .455 (Bases which precede the \214rst windo)5.455 F 2.955(wo)-.25 G 2.955(rf) -2.955 G(ollo)-2.955 E 2.955(wt)-.25 G .455(he last)-2.955 F(windo)144 220.8 Q 2.778(wa)-.25 G .278(re e)-2.778 F .279 (xcluded from the clean range \(so the tw)-.15 F 2.779(ot)-.1 G .279 (erminal windo)-2.779 F .279(ws brack)-.25 F .279(et the clean range\).) -.1 F(The def)144 244.8 Q(aults for windo)-.1 E(w_size and max_a)-.25 E (vg_error are 10 and 0.02.)-.2 E F1(\255quiet)108 261.6 Q F0 -.7(Te)8.63 G(lls).7 E F2(lucy)2.5 E F0 (to shut up and only report serious errors it \214nds. :\))2.5 E F1 (\255inf)108 278.4 Q(orm_me)-.25 E F0(Asks)144 290.4 Q F2(lucy)3.379 E F0 .879(to report sequences by names that ha)3.379 F 1.179 -.15(ve b)-.2 H .879(een thro).15 F .879(wn out due to lo)-.25 F 3.378(wq)-.25 G .878 (uality v)-3.378 F .878(alues, or)-.25 F(salv)144 302.4 Q (aged due to comparison to the 2nd sequence \214le.)-.25 E F1 (\255xtra cpu_thr)108 319.2 Q(eads)-.18 E F0 .147(If you ha)144 331.2 R .447 -.15(ve m)-.2 H .147(ultiple CPUs in your computer).15 F 2.647(,y) -.4 G .147(ou can dramatically increase luc)-2.647 F(y')-.15 E 2.648(ss) -.55 G .148(peed by allo)-2.648 F(w-)-.25 E 1.575(ing luc)144 343.2 R 4.075(yt)-.15 G 4.075(or)-4.075 G 1.575(un multiple e)-4.075 F -.15(xe) -.15 G(cution).15 E F2(thr)4.075 E(eads)-.37 E F0(concurrently)4.075 E 4.075(.F)-.65 G 1.575(or e)-4.225 F 1.575(xample, if you ha)-.15 F 1.875 -.15(ve a d)-.2 H(ual-CPU).15 E(computer)144 355.2 Q 2.804(,y)-.4 G .304 (ou can gi)-2.804 F .604 -.15(ve t)-.25 H .304(he option).15 F F1 .304 (-xtra 2)2.804 F F0 .304(to cut luc)2.804 F(y')-.15 E 2.804(se)-.55 G -.15(xe)-2.954 G .304(cution time roughly in half. By def).15 F(ault,) -.1 E(luc)144 367.2 Q 2.581(yw)-.15 G .081 (ill run just one thread if this option is not gi)-2.581 F -.15(ve)-.25 G .08(n. The maximum number of allo).15 F -.1(wa)-.25 G .08(ble threads) .1 F .753(is 32. Note that this option is only a)144 379.2 R -.25(va)-.2 G .753(ilable with the multi-threaded luc).25 F 3.253(yv)-.15 G .754 (ersion 1.16p. There is)-3.403 F(also a 1.16s v)144 391.2 Q (ersion that does not do multi-threading.)-.15 E/F3 9/Times-Bold@0 SF (ENVIR)72 408 Q(ONMENT)-.27 E F0 1.859(The en)108 420 R 1.859 (vironment v)-.4 F(ariable)-.25 E F1(VECT)4.359 E(OR_FILE)-.18 E F0 1.858(de\214nes the v)4.359 F 1.858(ector \214le name, and the en)-.15 F 1.858(vironment v)-.4 F(ariable)-.25 E F1(SPLICE_FILE)108 432 Q F0 1.029 (de\214nes the splice site \214le name. Both v)3.528 F 1.029 (ariables are used when the user does not specify)-.25 F(them using the) 108 444 Q F1(-v)2.5 E(ector)-.1 E F0(option.)2.5 E F3(SEE ALSO)72 460.8 Q F0(TIGR_Assembler\(1\), grim\(1\), e)108 472.8 Q -.15(ve)-.25 G (rm.sp\(1\), phred\(1\), T).15 E(raceT)-.35 E(uner\(1\), and eth)-.45 E (yl.pl\(1\).)-.05 E F3 -.09(BU)72 489.6 S(GS).09 E F0(No kno)108 501.6 Q (wn b)-.25 E(ugs for the program at this moment. Some of the manual pag\ es mentioned abo)-.2 E .3 -.15(ve d)-.15 H 2.5(on).15 G(ot e)-2.5 E (xist.)-.15 E F3(CA)72 518.4 Q(VEA)-1.305 E(TS)-.855 E F0 .731 (The "no b)108 530.4 R .731(ugs" claim abo)-.2 F 1.031 -.15(ve c)-.15 H .731(an ne).15 F -.15(ve)-.25 G 3.231(rb).15 G 3.231(et)-3.231 G .731 (rue. This is a ne)-3.231 F 3.23(wp)-.25 G .73(rogram b)-3.23 F .73 (uilt mostly from scratch, and there)-.2 F(must be b)108 542.4 Q (ugs some)-.2 E(where, someho)-.25 E 1.3 -.65(w. P)-.25 H (lease direct all b).65 E(ug reports to the authors.)-.2 E F3 -.495(AC) 72 559.2 S -.27(RO).495 G(NYM).27 E F2(Lucy)108 571.2 Q F0 .355 (stands for)2.855 F F1 .355(Less Useful Chunks Y)2.855 F(ank,)-.85 E F0 .355(an a)2.855 F(wkw)-.15 E .355(ard combination of w)-.1 F .355 (ords in order to mak)-.1 F 2.855(ei)-.1 G 2.855(tam)-2.855 G(em-)-2.855 E .986(ber of the f)108 583.2 R .986(amily with phred, the base caller) -.1 F 3.486(,e)-.4 G(th)-3.486 E .985(yl, the old scripting system luc) -.05 F 3.485(yr)-.15 G .985(eplaced, and rick)-3.485 F 2.285 -.65(y, t) -.15 H(he).65 E(database linking and communication dri)108 595.2 Q (ving softw)-.25 E(are of luc)-.1 E 2.5(yf)-.15 G(or use in TIGR.)-2.5 E F3 -.45(AU)72 612 S(THOR).45 E F2(Lucy)108 624 Q F0 -.1(wa)3.755 G 3.755 (sw).1 G 1.255(ritten by Hui-Hsien Chou and Michael Holmes at The Insti\ tute for Genomic Research, with)-3.755 F .757(help and suggestions from\ Granger Sutton, Anna Glodek, John Scott, and T)108 636 R .757 (erry Shea. Michael Holmes is)-.7 F(currently responsible for)108 648 Q F2(lucy)2.5 E(.)-.55 E F0(Please direct an)5 E 2.5(ys)-.15 G (uggestions, b)-2.5 E(ug reports, etc. to mholmes@tigr)-.2 E(.or)-.55 E (g.)-.18 E(TIGR softw)72 768 Q 148.56(are 10/28/2000)-.1 F(6)206.22 E EP %%Trailer end %%EOF lucy-1.20p/pSPORT1splice0000644000245300000770000000173207227110066014264 0ustar mholmestigr>pSPORT1.for.begin CCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCT ATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGG GTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAATTGAATTTAGGTGACACTAT AGAAGAGCTATGACGTCGCATGCACGCGTACGTAAGCTTGGATCCTCTAGAGCTCGACCC ACGCGTCCG >pSPORT1.for.end TCGACCCACGCGTCCGGGCCGCCGACTAGTGAGCTCGTCGACCCGGGAATTCCGGACCGG TACCTGCAGGCGTACCAGCTTTCCCTATAGTGAGTCGTATTAGAGCTTGGCGTAATCATG GTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGC CGGAAGCATAAAGTGTAAAG >pSPORT1.rev.beg CTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTC ACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTCTAATACGACTCACTATAGGGAA AGCTGGTACGCCTGCAGGTACCGGTCCGGAATTCCCGGGTCGACGAGCTCACTAGTCGGC GGCCCGGACGCGTGGGTCGA >pSPORT1.rev.end CGGACGCGTGGGTCGAGCTCTAGAGGATCCAAGCTTACGTACGCGTGCATGCGACGTCAT AGCTCTTCTATAGTGTCACCTAAATTCAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGAC TGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGC TGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAAT GGCGAATGG lucy-1.20p/pSPORT1vector0000644000245300000770000001013307227110067014303 0ustar mholmestigr>pSPORT1 CCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCT ATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGG GTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAATTGAATTTAGGTGACACTAT AGAAGAGCTATGACGTCGCATGCACGCGTACGTAAGCTTGGATCCTCTAGAGCGGCCGCC GACTAGTGAGCTCGTCGACCCGGGAATTCCGGACCGGTACCTGCAGGCGTACCAGCTTTC CCTATAGTGAGTCGTATTAGAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAA ATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCT GGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCC AGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCG GTTTGCGTATTGGGCGCCAGGGTGGTTTTTCTTTTCACCAGTGAGACGGGCAACAGCTGA TTGCCCTTCACCGCCTGGCCCTGAGAGAGTTGCAGCAAGCGGTCCACGCTGGTTTGCCCC AGCAGGCGAAAATCCTGTTTGATGGTGGTTAACGGCGGGATATAACATGAGCTGTCTTCG GTATCGTCGTATCCCACTACCGAGATATCCGCACCAACGCGCAGCCCGGACTCGGTAATG GCGCGCATTGCGCCCAGCGCCATCTGATCGTTGGCAACCAGCATCGCAGTGGGAACGATG CCCTCATTCAGCATTTGCATGGTTTGTTGAAAACCGGACATGGCACTCCAGTCGCCTTCC CGTTCCGCTATCGGCTGAATTTGATTGCGAGTGAGATATTTATGCCAGCCAGCCAGACGC AGACGCGCCGAGACAGAACTTAATGGGCCCGCTAACAGCGCGATTTGCTGGTGACCCAAT GCGACCAGATGCTCCACGCCCAGTCGCGTACCGTCTTCATGGGAGAAAATAATACTGTTG ATGGGTGTCTGGTCAGAGACATCAAGAAATAACGCCGGAACATTAGTGCAGGCAGCTTCC ACAGCAATGGCATCCTGGTCATCCAGCGGATAGTTAATGATCAGCCCACTGACCCGTTGC GCGAGAAGATTGTGCACCGCCGCTTTACAGGCTTCGACGCCGCTTCGTTCTACCATCGAC ACCACCACGCTGGCACCCAGTTGATCGGCGCGAGATTTAATCGCCGCGACAATTTGCGAC GGCGCGTGCAGGGCCAGACTGGAGGTGGCAACGCCAATCAGCAACGACTGTTTGCCCGCC AGTTGTTGTGCCACGCGGTTGGGAATGTAATTCAGCTCCGCCATCGCCGCTTCCACTTTT TCCCGCGTTTTCGCAGAAACGTGGCTGGCCTGGTTCACCACGCGGGAAACGGTCTGATAA GAGACACCGGCATACTCTGCGACATCGTATAACGTTACTGGTTTCACATTCACCACCCTG AATTGACTCTCTTCCGGGCGCTATCATGCCATACCGCGAAAGGTTTTGCGCCATTCGATG GTGTCAACGTAAATGCCGCTTCGCCTTCGCGCGCGAATTGCAAGCTCTGCATTAATGAAT CGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCAC TGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGT AATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCA GCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCC CCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACT ATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCT GCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCAATG CTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCA CGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAA CCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGC GAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAG AAGGACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGG TAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCA GCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTC TGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAG GATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATA TGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGAT CTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACG GGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGC TCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGC AACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTC GCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTC GTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATC CCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAA GTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCAT GCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATA GTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACA TAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAG GATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTC AGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGC AAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATA TTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTA GAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGAAATTGT AAACGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAA CCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTT GAGTGTTGTTCCAGTTTGGAACAAGAGTCCACTATTAAAGAACGTGGACTCCAACGTCAA AGGGCGAAAAACCGTCTATCAGGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCTAATCAAG TTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATT TAGAGCTTGACGGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGGAAGGGAAGAAAGCGAAAGG AGCGGGCGCTAGGGCGCTGGCAAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCACCACACCCGC CGCGCTTAATGCGCCGCTACAGGGCGCGTClucy-1.20p/poly.c0000644000245300000770000000362307651004576013132 0ustar mholmestigr/**************************************************************************** * * Copyright (c) 2003, The Institute for Genomic Research (TIGR), Rockville, * Maryland, U.S.A. All rights reserved. * ****************************************************************************/ #define A 0 #define T 3 int cdna, cerr, crng, keep; int poly_at_left(seq, len) char *seq; int len; { register int i, err, ttt, pos; /* find the first 'cdna' number of connected T's in the first 'crng' bases of the input sequence */ for (i=pos=ttt=0; i=cdna) break; } else ttt=0; if (i>=crng || i>=len) /* found nothing within 'crng', return nil */ return pos; if (keep) /* keep the poly-T tag for identification purpose */ return i-ttt+1; /* extend span of poly-T within 'cerr' error tolerance */ for (i++, seq++, err=0; i=cdna) err=0; } else { if (err<=0) pos=i; err++; ttt=0; if (err>cerr) return pos; } return len; } int poly_at_right(seq, len) char *seq; int len; { register int i, err, aaa, pos; /* find the last 'cdna' number of connected A's in the last 'crng' bases of the input sequence */ for (i=pos=aaa=0; i=cdna) break; } else aaa=0; if (i>=crng || i>=len) /* found nothing within 'crng', return nil */ return pos; if (keep) /* keep the poly-A tag for identification purpose */ return i-aaa+1; /* extend span of poly-A within 'cerr' error tolerance */ for (i++, seq--, err=0; i=cdna) err=0; } else { if (err<=0) pos=i; err++; aaa=0; if (err>cerr) return pos; } return len; } lucy-1.20p/qual_trim.c0000644000245300000770000005726607651004610014145 0ustar mholmestigr/**************************************************************************** * * Copyright (c) 2003, The Institute for Genomic Research (TIGR), Rockville, * Maryland, U.S.A. All rights reserved. * ****************************************************************************/ /**************************************************************************/ /* /* qual_trim.c - Quality trimming algorithm which determines a "clean" /* range for a sequence based on its phred quality values. /* /* Written by Michael Holmes, 4/13/99. /* /* 1/31/2000, Michael Holmes -- Added default_windows(). /* 2/15/2000, Michael Holmes -- Added bracket_clean_range() and /* set_bracket(). /* 2/18/2000, Michael Holmes -- Minor change to test-mode output only. /* /* Copyright (C) 1999, 2000, The Institute for Genomic Research. All rights /* reserved. /* /* Note: phred quality values are based on the log (base 10) of the /* probability that the corresponding base call is in error: /* /* Q = -10 log(P_error) /* /* Thanks to Granger Sutton for valuable suggestions. /* /* The main functions of interest to external code (such as lucy) are /* default_windows() and quality_trim(). The grim() function emulates the /* interface that was used by the old quality trimmimg algorithm (grim), /* but it is not called by lucy. The main() function is compiled only if /* TEST_THIS_CODE is #defined. /* /* The calling hierarchy is: /* /* main() /* grim() /* default_windows() /* quality_trim() /* bracket_clean_range() /* multi_window_trim() /* window_trim() /* multi_window_trim() [recursive call] /* average_error_trim() /* /**************************************************************************/ #include #include #include #include /* the highest quality value for which we have computed the */ /* corresponding probability of error */ #define MAX_QUALITY 99 /* Note: the max number of windows is 20 */ #define MAX_NUMBER_OF_WINDOWS 20 /* default for maximum average probability of error */ #define DEFAULT_ERROR_THRESHOLD 0.025 /* default for maximum probability of error at each end of clean range */ #define DEFAULT_END_LIMIT 0.02 /* default window size for terminal windows */ #define DEFAULT_BRACKET_WINDOW 10 /* default max average error in terminal windows */ #define DEFAULT_BRACKET_ERROR 0.02 #define TRUE 1 #define FALSE 0 #define max(a,b) (((a) > (b)) ? (a): (b)) #define min(a,b) (((a) < (b)) ? (a): (b)) /* global variables and arrays: */ /* probability of base call error for phred quality values */ /* from 0 to 99 (indexed by quality) */ double perr[] = { 1.000000e+00, 7.943282e-01, 6.309573e-01, 5.011872e-01, 3.981072e-01, 3.162278e-01, 2.511886e-01, 1.995262e-01, 1.584893e-01, 1.258925e-01, 1.000000e-01, 7.943282e-02, 6.309573e-02, 5.011872e-02, 3.981072e-02, 3.162278e-02, 2.511886e-02, 1.995262e-02, 1.584893e-02, 1.258925e-02, 1.000000e-02, 7.943282e-03, 6.309573e-03, 5.011872e-03, 3.981072e-03, 3.162278e-03, 2.511886e-03, 1.995262e-03, 1.584893e-03, 1.258925e-03, 1.000000e-03, 7.943282e-04, 6.309573e-04, 5.011872e-04, 3.981072e-04, 3.162278e-04, 2.511886e-04, 1.995262e-04, 1.584893e-04, 1.258925e-04, 1.000000e-04, 7.943282e-05, 6.309573e-05, 5.011872e-05, 3.981072e-05, 3.162278e-05, 2.511886e-05, 1.995262e-05, 1.584893e-05, 1.258925e-05, 1.000000e-05, 7.943282e-06, 6.309573e-06, 5.011872e-06, 3.981072e-06, 3.162278e-06, 2.511886e-06, 1.995262e-06, 1.584893e-06, 1.258925e-06, 1.000000e-06, 7.943282e-07, 6.309573e-07, 5.011872e-07, 3.981072e-07, 3.162278e-07, 2.511886e-07, 1.995262e-07, 1.584893e-07, 1.258925e-07, 1.000000e-07, 7.943282e-08, 6.309573e-08, 5.011872e-08, 3.981072e-08, 3.162278e-08, 2.511886e-08, 1.995262e-08, 1.584893e-08, 1.258925e-08, 1.000000e-08, 7.943282e-09, 6.309573e-09, 5.011872e-09, 3.981072e-09, 3.162278e-09, 2.511886e-09, 1.995262e-09, 1.584893e-09, 1.258925e-09, 1.000000e-09, 7.943282e-10, 6.309573e-10, 5.011872e-10, 3.981072e-10, 3.162278e-10, 2.511886e-10, 1.995262e-10, 1.584893e-10, 1.258925e-10 }; /* number of windows for window trimming */ int num_windows = 3; /* the window sizes, and max allowed average probability of error in window */ /* Note: the max number of windows is 20 */ int windows[MAX_NUMBER_OF_WINDOWS]; double err_limits[MAX_NUMBER_OF_WINDOWS]; /* the maximum allowed average probability of error over the entire clean range */ double max_avg_error = DEFAULT_ERROR_THRESHOLD; /* the maximum allowed probability of error for the 2 bases at the left and right */ /* ends of the clean range */ double end_limit = DEFAULT_END_LIMIT; /* the terminal window size and allowable error used to do an initial */ /* trim of low-quality base calls from each end of sequence */ double bracket_error = DEFAULT_BRACKET_ERROR; int bracket_window = DEFAULT_BRACKET_WINDOW; /* these globals are necessary so that my "grim" function can */ /* simulate the old "grim" function */ int *conf_val_raw; /**************************************************************************/ /* /* Determines some number of candidate clean ranges using a particular /* window size. /* /* Globals used: /* double end_limit, (maximum allowed probability of error for bases) /* ( at each end of clean range) /* */ void window_trim( double *prob_err, /* array of phred error probabilities */ int length, /* number of probabilities (length of sequence) */ double err_limit, /* maximum allowed average probability of error in window */ int window, /* window size */ int min_frag_length, /* minimum acceptable fragment size */ int *num_ranges, /* number of separate clean ranges found */ int *range_start, /* caller-allocated array for storage of range */ /* start values (0..length - 1) */ int *range_end /* caller-allocated array for storage of range */ /* end values (0..length - 1) */ ) { register double win_limit, win_err; register int lidx, ridx, win_idx, end_idx; int i; int range_idx; /* initialize number of clean ranges */ *num_ranges = 0; /* length of sequence must be at least the window size */ if (length < window || length < min_frag_length) return; /* calculate max allowable cumulative error for window */ win_limit = err_limit * (double)window; /* calculate cumulative error for first window */ for (i = 0, win_err = 0.0; i < window; i++) win_err += prob_err[i]; /* initialize index to storage of candidate clean ranges */ range_idx = 0; /* initialize left, right indices for next clean range */ lidx = ridx = -1; /* initialize window beginning and end indices */ win_idx = 0; end_idx = window - 1; /* look at each window in turn */ while (end_idx < length) { /* is current window's cumulative error probability OK ? */ if (win_err <= win_limit) { /* yes, mark the start of a clean range if we're */ /* not already in one, and if the first base of window */ /* has acceptable error probability */ if (lidx < 0 && prob_err[win_idx] <= end_limit) { lidx = win_idx; } /* if we're in a clean range and last base of window */ /* has acceptable error probability, mark it as the */ /* provisional end of the still-expanding clean range */ if (lidx >= 0 && prob_err[end_idx] <= end_limit) { ridx = end_idx; } } else { /* no, is this the end of a clean range ? */ if (lidx >= 0 && ridx >= 0 && (ridx - lidx + 1) >= min_frag_length) { /* yes, save clean range start and end */ /* as base indices (0..length-1) */ range_start[range_idx] = lidx; range_end[range_idx] = ridx; /* increment clean range index */ range_idx++; } /* mark the fact that we're not within a clean range */ lidx = ridx = -1; } /* advance the window */ win_err -= prob_err[win_idx]; win_idx++; end_idx++; /* (Note: here's why we allocated one extra cell in prob_err array) */ win_err += prob_err[end_idx]; } /* were we inside a clean range at end of while loop ? */ if (lidx >= 0 && ridx >= 0 && (ridx - lidx + 1) >= min_frag_length) { /* yes, save clean range start and end */ /* as base indices (0..length-1) */ range_start[range_idx] = lidx; range_end[range_idx] = ridx; /* increment clean range index */ range_idx++; } /* store number of clean ranges found for caller */ *num_ranges = range_idx; } /* window_trim() */ /**************************************************************************/ /* /* Finds the largest subsequence of a sequence whose average probability /* of error does not exceed a specified maximum. /* /* Globals used: /* double max_avg_error, (maximum allowed average probability of error) /* double end_limit, (maximum allowed probability of error for bases) /* ( at each end of clean range) /* */ void average_error_trim( double *prob_err, /* array of phred error probabilities */ int length, /* number of quality values (length of sequence) */ int min_frag_length, /* minimum acceptable clean fragment length */ int *cln_left, /* base index (0..length-1) of start of clean range */ int *cln_right /* base index (0..length-1) of end of clean range */ ) { int i, j, frag_length; int diag_count; int done; double *diag, this_err; /* initialize caller's clean range */ *cln_left = *cln_right = 0; /* if sequence is too short, we're done */ if (length < min_frag_length) return; /* allocate space for cumulative error values on the diagonal */ diag = (double *)malloc((size_t)(length + 1) * sizeof(double)); if (diag == NULL) { fprintf(stderr, "Memory allocation failure in find_largest_clean_range.\n"); exit(1); } /* calculate the single diagonal value for corner of matrix */ /* (corresponding to the full-length sequence) */ for (i = 0, *diag = 0.0; i < length; i++) { *diag += prob_err[i]; } frag_length = length; done = FALSE; while (frag_length >= min_frag_length && !done) { /* calculate cumulative error of last cell on next diagonal */ diag_count = length - frag_length + 1; diag[diag_count] = diag[diag_count - 1] - prob_err[diag_count - 1]; /* consider each value on this diagonal */ for (i = 0, j = frag_length - 1; j < length; i++, j++) { /* calculate average error of bases i..j */ this_err = diag[i] / (double)frag_length; /* is it good enough ? */ if (this_err <= max_avg_error) { /* yes, this is our clean range */ *cln_left = i; *cln_right = j; done = TRUE; break; } else { /* for next diagonal, subtract out error of last base in range */ diag[i] -= prob_err[j]; } } /* decrement fragment length of next diagonal */ frag_length--; } /* make sure the ends of the clean range are OK */ if (*cln_right > 0) { while (prob_err[*cln_left] > end_limit) (*cln_left)++; while (prob_err[*cln_right] > end_limit) (*cln_right)--; } /* check fragment length */ if (*cln_right - *cln_left + 1 < min_frag_length) { *cln_left = *cln_right = 0; } /* free allocated array */ free(diag); } /* average_error_trim() */ /**************************************************************************/ /* /* Determines a single clean range, after recursively considering all of /* the specified window sizes. Calls average_error_trim to trim the /* results of the final window based on overall average probability of /* error. /* /* Globals used: /* double max_avg_error, (maximum allowed average probability of error) /* double end_limit, (maximum allowed probability of error for bases) /* ( at each end of clean range) /* */ void multi_window_trim( double *prob_err, /* array of phred error probabilities */ int length, /* number of quality values (length of sequence) */ int num_windows, /* number of windows */ int *windows, /* array of window sizes (largest to smallest) */ double *err_limits, /* array of maximum allowed average probability */ /* for each window size */ int min_frag_length, /* the minimum acceptable length of a fragment */ int *cln_left, /* base index (0..length-1) of start of clean range */ int *cln_right /* base index (0..length-1) of end of clean range */ ) { int *range_start, *range_end; int num_ranges, left, right, i, max_clean; /* initialize caller's clean range */ *cln_left = *cln_right = 0; /* allocate space for start and end of each candidate clean range */ range_start = (int *)malloc((size_t)(length + 1) * sizeof(int)); if (range_start == NULL) { fprintf(stderr, "Memory allocation failure in multi_window_trim.\n"); exit(1); } range_end = (int *)malloc((size_t)(length + 1) * sizeof(int)); if (range_end == NULL) { fprintf(stderr, "Memory allocation failure in multi_window_trim.\n"); exit(1); } /* trim sequence to largest window size */ window_trim(prob_err, length, err_limits[0], windows[0], min_frag_length, &num_ranges, range_start, range_end); /* any clean ranges found ? */ if (num_ranges > 0) { #ifdef TEST_THIS_CODE if (num_windows == 3) fprintf(stderr, "Ranges: "); #endif /* yes, any smaller windows to be dealt with ? */ if (num_windows > 1) { /* yes, trim each candidate clean range by the smaller windows */ for (i = 0; i < num_ranges; i++) { /* recursive call */ multi_window_trim( prob_err + range_start[i], range_end[i] - range_start[i] + 1, num_windows - 1, windows + 1, err_limits + 1, min_frag_length, &left, &right); if (right > 0) { range_end[i] = right + range_start[i]; range_start[i] = left + range_start[i]; } else { range_start[i] = range_end[i] = 0; } } } else { /* no, trim each of the bottom-level ranges based on average quality */ for (i = 0; i < num_ranges; i++) { average_error_trim(prob_err + range_start[i], range_end[i] - range_start[i] + 1, min_frag_length, &left, &right); if (right > 0) { range_end[i] = right + range_start[i]; range_start[i] = left + range_start[i]; } else { range_start[i] = range_end[i] = 0; } } } #ifdef TEST_THIS_CODE if (num_windows == 1) { for (i = 0; i < num_ranges; i++) if (range_end[i] > 0) fprintf(stderr, "%d ", range_end[i] - range_start[i] + 1); } else if (num_windows == 3) fprintf(stderr, "\n"); #endif /* find the largest clean range */ max_clean = -1; for (i = 0; i < num_ranges; i++) { if (range_end[i] > 0 && range_end[i] - range_start[i] > max_clean) { max_clean = range_end[i] - range_start[i]; *cln_left = range_start[i]; *cln_right = range_end[i]; } } } /* free allocated arrays */ free(range_start); free(range_end); } /* multi_window_trim() */ /**************************************************************************/ /* /* Sets the window size and average probability of error allowed for the /* terminal windows that "bracket" the candidate clean range. /* /* Globals used: /* int bracket_window, (size of terminal window) /* double bracket_error (allowable average prob. error in window) /* */ void set_bracket(int window_size, double max_error) { bracket_window = window_size; bracket_error = max_error; } /* set_bracket() */ /**************************************************************************/ /* /* Finds the leftmost window, and the rightmost window, which meet the /* specified error criterion. The purpose of this function is to bracket /* the portion of the sequence that is of decent quality -- i.e. to /* eliminate the really bad quality stuff that is often found on either /* end. The beginning of the first matching window, and the end of the /* last, bracket the sequence range that will be looked at to find the /* final clean range. /* /* This function is called before the multi_window_trim function, and /* its results are used to limit the range of sequence that will be /* considered by that function. /* */ void bracket_clean_range( double *prob_err, /* array of phred error probabilities */ int length, /* number of quality values (length of sequence) */ int window_len, /* size of window */ double max_err, /* maximum allowable average error in window */ int min_frag_length, /* the minimum acceptable length of a fragment */ int *cln_left, /* base index (0..length-1) of start of clean range */ int *cln_right /* base index (0..length-1) of end of clean range */ ) { int left, right; int i, j; double cum_error, max_cum_error; /* initialize caller's clean range */ *cln_left = *cln_right = 0; /* initialize my left and right brackets */ left = right = -1; /* calculate cumulative allowable error in window */ max_cum_error = (double)window_len * max_err; /* calculate cumulative error in first window */ for (i = 0, cum_error = 0.0; i < window_len; i++) { cum_error += prob_err[i]; } /* test first window */ if (cum_error <= max_cum_error) { /* it passes, set left and right brackets */ left = 0; right = window_len - 1; } /* test the remaining windows */ /* i is index to beginning of previous window */ /* j is index to end of current window */ for (i = 0, j = window_len; j < length; i++, j++) { /* calculate cumulative error in this window */ cum_error = cum_error - prob_err[i] + prob_err[j]; /* test window */ if (cum_error <= max_cum_error) { /* window passes */ /* leave left bracket alone if it's already set */ if (left < 0) { /* set left bracket to start of current window */ left = i + 1; } /* set right bracket to end of current window */ right = j; } } /* did we bracket a sequence of sufficient length ? */ if (right > 0 && (right - left + 1) >= min_frag_length) { /* yes, set caller's clean range variables */ *cln_left = left; *cln_right = right; } #ifdef TEST_THIS_CODE fprintf(stderr, "Bracket: %d %d\n", *cln_left, *cln_right); #endif } /* bracket_clean_range() */ /**************************************************************************/ /* /* Determines the clean range. Calls multi_window_trim, which calls both /* window_trim and average_error_trim. /* /* Globals used: /* int num_windows, (number of windows) /* int *windows, (array of window sizes (largest to smallest)) /* double *err_limits, (array of maximum allowed average probability) /* ( for each window size) /* double max_avg_error, (maximum allowed average probability of error) /* double end_limit, (maximum allowed probability of error for bases) /* ( at each end of clean range) /* int bracket_window, (size of terminal window) /* double bracket_error (allowable average prob. error in window) /* */ void quality_trim( int *quality, /* array of phred quality values */ int length, /* number of quality values (length of sequence) */ int min_frag_length, /* minimum acceptable clean fragment length */ int *cln_left, /* base index (0..length-1) of start of clean range */ int *cln_right /* base index (0..length-1) of end of clean range */ ) { int i, q; int left, right; int min_left, max_right; double *prob_err; double err, sum; /* initialize caller's clean range */ *cln_left = *cln_right = 0; /* if sequence is too short, we're done */ if (length < min_frag_length) return; /* allocate space for error probabilities */ /* (allocate length + 1 locations for computational convenience) */ prob_err = (double *)malloc((size_t)(length + 1) * sizeof(double)); if (prob_err == NULL) { fprintf(stderr, "Memory allocation failure in quality_trim.\n"); exit(1); } /* convert qualities to error probabilities */ for (i = 0; i < length; i++) { q = quality[i]; if (q > MAX_QUALITY) q = MAX_QUALITY; prob_err[i] = perr[q]; } /* set the extra value at end of array */ prob_err[length] = 0.0; /* find beginning and end of reasonable-quality sequence */ left = right = 0; bracket_clean_range(prob_err, length, bracket_window, bracket_error, min_frag_length, &min_left, &max_right); if (max_right > 0) { /* find largest sequence that matches all our window criteria */ multi_window_trim(prob_err + min_left, max_right - min_left + 1, num_windows, windows, err_limits, min_frag_length, &left, &right); if (right > 0) { left = left + min_left; right = right + min_left; } } if (right > 0 && (right - left + 1) >= min_frag_length) { /* store clean range for caller */ *cln_left = left; *cln_right = right; } #ifdef TEST_THIS_CODE if (right > 0) { /* calculate the probability of error of the final clean range */ for (i = left, sum = 0.0; i <= right; i++) { sum += prob_err[i]; } err = sum / (double)(right - left + 1); if (err > max_avg_error) { /* error -- this shouldn't happen */ fprintf(stderr, "*** Error: %lf %lf\n", err, max_avg_error); } } #endif /* free allocated array */ free(prob_err); } /* quality_trim() */ /**************************************************************************/ /* /* Sets up 3 windows for quality trimming, with the average error allowed /* in each window calculated from max_avg_error. /* /* Globals used: /* int num_windows, (number of windows) /* int *windows, (array of window sizes (largest to smallest)) /* double *err_limits, (array of maximum allowed average probability) /* (for each window size) /* double max_avg_error, (maximum allowed average probability of error) /* */ void default_windows(void) { /* 3 fixed window sizes: 100, 30, 5 */ num_windows = 2; windows[0] = 50; windows[1] = 10; /* error criteria for windows are looser than for full-length */ /* clean range */ /* err_limits[0] = (5.0 + 95.0 * max_avg_error) / 100.0; err_limits[1] = (3.0 + 27.0 * max_avg_error) / 30.0; err_limits[2] = (1.0 + 4.0 * max_avg_error) / 5.0; */ err_limits[0] = 0.08; err_limits[1] = 0.3; } /* default_windows() */ /**************************************************************************/ /* /* Simulates the functionality of the old grim() function, by calling /* quality_trim(). /* /* Globals used: /* int num_windows, (number of windows) /* int *windows, (array of window sizes (largest to smallest)) /* double *err_limits, (array of maximum allowed average probability) /* (for each window size) /* double max_avg_error, (maximum allowed average probability of error) /* double end_limit, (maximum allowed probability of error for bases) /* ( at each end of clean range) /* */ void grim(int length, int *left, int *right) { /* set up windows for quality trimming */ default_windows(); /* the full-length clean range must have an average probability */ /* of error no greater than max_avg_error */ quality_trim( conf_val_raw, /* the raw quality values */ length, /* length of sequence */ 100, /* minimum acceptable clean range length */ left, /* pointer to caller's start index */ right /* pointer to caller's end index */ ); } /* grim() */ #ifdef TEST_THIS_CODE /**************************************************************************/ void main(int argc, char **argv) { int quality[10000]; int qual_count, length, i; int left, right; char line_buff[4096], seq_name[80], *sptr; if (argc > 1) { max_avg_error = atof(argv[1]); } if (argc > 2) { end_limit = atof(argv[2]); } /* read first line and get seq name */ fgets(line_buff, 4096, stdin); sptr = strtok(line_buff, "> \t\r\n"); if (sptr == NULL) { exit(1); } strcpy(seq_name, sptr); /* read remaining lines and populate quality values array */ i = 0; while (fgets(line_buff, 4096, stdin) != NULL) { sptr = strtok(line_buff, " \t\r\n"); while (sptr != NULL) { quality[i++] = atoi(sptr); sptr = strtok(NULL, " \t\r\n"); } } qual_count = i; /* trim for quality */ conf_val_raw = quality; grim(qual_count, &left, &right); if (right > 0) { left++; right++; } /* display seq name and clean range */ if (right - left < 99) left = right = 0; printf("%s\tCLN\t%d\t%d\n", seq_name, left, right); exit(0); } /* main() */ #endif lucy-1.20p/splice.c0000644000245300000770000001645707651004617013433 0ustar mholmestigr/**************************************************************************** * * Copyright (c) 2003, The Institute for Genomic Research (TIGR), Rockville, * Maryland, U.S.A. All rights reserved. * ****************************************************************************/ #define MAXIMUM_THREADS 32 #define NIL 0 #define LFT 1 #define DIA 2 #define TOP 3 #define Score(x, y) splice_score_base[(y)*width+(x)] #define Direc(x, y) splice_direc_base[(y)*width+(x)] int *splice_match_base; int *splice_score_pool[MAXIMUM_THREADS+1]; char *splice_direc_pool[MAXIMUM_THREADS+1]; static int match[16][16]={ /* A C G T U R Y M W S K D H V B N */ /*A*/ { 5,-14,-14,-14,-14, 2,-14, 2, 2,-14,-14, 1, 1, 1,-14, 0,}, /*C*/ {-14, 5,-14,-14,-14,-14, 2, 2,-14, 2,-14,-14, 1, 1, 1, 0,}, /*G*/ {-14,-14, 5,-14,-14, 2,-14,-14,-14, 2, 2, 1,-14, 1, 1, 0,}, /*T*/ {-14,-14,-14, 5, 5,-14, 2,-14, 2,-14, 2, 1, 1,-14, 1, 0,}, /*U*/ {-14,-14,-14, 5, 5,-14, 2,-14, 2,-14, 2, 1, 1,-14, 1, 0,}, /*R*/ { 2,-14, 2,-14,-14, 2,-14, 1, 1, 1, 1, 1, 0, 1, 0, 0,}, /*Y*/ {-14, 2,-14, 2, 2,-14, 2, 1, 1, 1, 1, 0, 1, 0, 1, 0,}, /*M*/ { 2, 2,-14,-14,-14, 1, 1, 2, 1, 1,-14, 0, 1, 1, 0, 0,}, /*W*/ { 2,-14,-14, 2, 2, 1, 1, 1, 2,-14, 1, 1, 1, 0, 0, 0,}, /*S*/ {-14, 2, 2,-14,-14, 1, 1, 1,-14, 2, 1, 0, 0, 1, 1, 0,}, /*K*/ {-14,-14, 2, 2, 2, 1, 1,-14, 1, 1, 2, 1, 0, 0, 1, 0,}, /*D*/ { 1,-14, 1, 1, 1, 1, 0, 0, 1, 0, 1, 1, 0, 0, 0, 0,}, /*H*/ { 1, 1,-14, 1, 1, 0, 1, 1, 1, 0, 0, 0, 1, 0, 0, 0,}, /*V*/ { 1, 1, 1,-14,-14, 1, 0, 1, 0, 1, 0, 0, 0, 1, 0, 0,}, /*B*/ {-14, 1, 1, 1, 1, 0, 1, 0, 0, 1, 1, 0, 0, 0, 1, 0,}, /*N*/ { 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0,}, /* A C G T U R Y M W S K D H V B N */ }; #define GAPOPEN -17 #define GAPGROW -5 static int left_penalty[]={ GAPOPEN, GAPGROW, GAPOPEN, GAPOPEN }; static int top_penalty[]={ GAPOPEN, GAPOPEN, GAPOPEN, GAPGROW }; void splice_align_left(id, a, width, b, height, offset, good, right_end) char *a, *b; int id, width, height, offset, good, *right_end; { register left, top, direc, score, i, j; register int *splice_score_base; register char *splice_direc_base; int max_score, max_i, max_j; splice_score_base=splice_score_pool[id]; splice_direc_base=splice_direc_pool[id]; *right_end=-1; if (width<2 || height<2) return; while (1) { /* keep trimming until no more vector found */ /* setting the upper-left-most cell */ Score(0,0)=max_score=match[*a][*b]; Direc(0,0)=NIL; max_i=max_j=0; /* setting the first row */ for (i=1; imax_score) { max_score=score; max_i=i; max_j=0; } } /* setting the first column */ for (j=1; jmax_score) { max_score=score; max_i=0; max_j=j; } } /* running dynamic programming for internal nodes */ for (j=1; j=0) { score+=match[a[i]][b[j]]; direc=DIA; } else { score=match[a[i]][b[j]]; direc=NIL; } top=Score(i,j-1)+top_penalty[Direc(i,j-1)]; left=Score(i-1,j)+left_penalty[Direc(i-1,j)]; if (top>left) { if (scoretop) { if (score=j*width) { direc=LFT; score=left; } else { direc=TOP; score=top; } } Direc(i,j)=direc; Score(i,j)=score; if (score>=max_score) { max_score=score; max_i=i; max_j=j; } } /* bracktrack to find the longest alignment path */ i=max_i; j=max_j; while (direc=Direc(i,j)) switch (direc) { case LFT: i--; break; case DIA: i--; j--; break; case TOP: j--; break; } /* check if done or continue chopping */ j=offset+max_i; left=max_i-i+1; if (leftmax_score) { max_score=score; max_i=i; max_j=0; } } /* setting the first column */ for (j=1; jmax_score) { max_score=score; max_i=0; max_j=j; } } /* running dynamic programming for internal nodes */ for (j=1; j=0) { score+=match[a[i]][b[j]]; direc=DIA; } else { score=match[a[i]][b[j]]; direc=NIL; } top=Score(i,j-1)+top_penalty[Direc(i,j-1)]; left=Score(i-1,j)+left_penalty[Direc(i-1,j)]; if (top>left) { if (scoretop) { if (score=j*width) { direc=LFT; score=left; } else { direc=TOP; score=top; } } Direc(i,j)=direc; Score(i,j)=score; if (score>=max_score) { max_score=score; max_i=i; max_j=j; } } /* bracktrack to find the longest alignment path */ i=max_i; j=max_j; while (direc=Direc(i,j)) switch (direc) { case LFT: i--; break; case DIA: i--; j--; break; case TOP: j--; break; } j=max_i-i+1; /* The length of a good hit must meet one of these 2 criteria: */ /* at least as long as the minimum good hit (span), and at least */ /* as long as the remaining target sequence that follows the hit; */ /* or longer than half the size of the splice sequence. */ if (j>=span && j>=width-max_i || j>height/2) *left_end=i+offset; } lucy-1.20p/vector.c0000640000245300000770000000632307770157072013447 0ustar mholmestigr/**************************************************************************** * * Copyright (c) 2003, The Institute for Genomic Research (TIGR), Rockville, * Maryland, U.S.A. All rights reserved. * ****************************************************************************/ #include #include extern void giveup(char *); static int Dlist[]={ 0, 2, 3}, Hlist[]={ 0, 1, 3}, rev_code[]={ 3, 2, 1, 0, 0, 6, 5, 10, 8, 9, 7, 12, 11, 14, 13, 15}; int tag_size; static int tag_len; static unsigned tag_mask; static unsigned *tag_well; int tag_code(c) int c; { register int tmp; switch (c) { case 0: tmp=0; break; case 1: tmp=1; break; case 2: tmp=2; break; case 3: case 4: tmp=3; break; case 5: tmp=random()%2 ? 2 : 0; break; case 6: tmp=random()%2 ? 3 : 1; break; case 7: tmp=random()%2 ; break; case 8: tmp=random()%2 ? 3 : 0; break; case 9: tmp=random()%2 ? 2 : 1; break; case 10: tmp=random()%2 ? 3 : 2; break; case 11: tmp=Dlist[random()%3]; break; case 12: tmp=Hlist[random()%3]; break; case 13: tmp=random()%3; break; case 14: tmp=random()%3+1; break; case 15: tmp=random()%4; break; default: giveup("how can other cases happen in tag_code?"); } return tmp; } void tag_sort(l, r) unsigned *l, *r; { register unsigned v, *i, *j, tmp; if (r>l) { v = *r; i = l-1; j = r; while (1) { while (*(++i) < v) ; while (j>l && *(--j) > v) ; if (i>=j) break; tmp = *i; *i = *j; *j = tmp; } tmp = *i; *i = *r; *r = tmp; tag_sort(l, i-1); tag_sort(i+1, r); } } void construct_vector_tags(seq, len) char *seq; int len; { register int i, j, k; register unsigned accf, accr; /* Note: this breaks the vector into non-overlapping tags of size tag_size */ tag_len=len/tag_size+(len%tag_size ? 1 : 0); tag_well=(unsigned*)malloc(sizeof(unsigned)*tag_len*2); if (tag_well==NULL) giveup("Memory allocation failure."); for (i=k=0; itag_well[m]) l=m+1; else { /* this tag matches a vector tag -- count all bases in the tag as matching, */ /* without double-counting any bases from the previous hit */ if (i-last_hit>=tag_size) hits+=tag_size; else hits+=i-last_hit; last_hit=i; break; } } } /* return the total number of matching bases */ return hits; } void destroy_vector_tags() { free(tag_well); } lucy-1.20p/zapping.awk0000644000245300000770000000067107347725471014165 0ustar mholmestigr#!/usr/bin/awk -f /^>/ { if (collect) { print name; seq=substr(seq, left, right-left+1); for (i=1; il) { v = r->tag; i = l-1; j = r; while (1) { while ((++i)->tag < v) ; while (j>l && (--j)->tag > v) ; if (i>=j) break; tmp = *i; *i = *j; *j = tmp; } tmp = *i; *i = *r; *r = tmp; abi_sort(l, i-1); abi_sort(i+1, r); } } void prepare_abi_mask() { register int i; register unsigned acc; /* construct abi_mask */ for (acc=i=0; iabi_well[m].tag) l=m+1; else { l=abi_well[m].index-i; for (j=0; jcount) { count=hit_well[j].count; diff=hit_well[j].diff; if (j) { hit_well[j]=hit_well[0]; hit_well[0].count=count; hit_well[0].diff=diff; } } break; } if (j>=hit_len) { hit_well[j].count=1; hit_well[j].diff=l; hit_len=j+1; } break; } } } /* calculate starting points for sequence a and b */ if (count<=0) { *start=*end=0; return; } else if (diff>=0) { i=diff; j=0; } else { i=0; j=-diff; } /* find the primary alignment region first */ for (span=0, left=x=i; icondition[m]; m++, l++, r++) if (badness[a[l]][b[r]]) count+=badness[a[l]][b[r]]; if (lspan) { left=x; span=i-x; } x=i+1; } if (i-x>span) { left=x; span=i-x; } if (span<=0) { *start=*end=0; return; } /* extend alignment region toward the right, if possible */ for (i=left+span, j=i-diff; i0) { for (count=stack[--x].c, m=stack[x].m, l=stack[x].i, r=stack[x].j; lcondition[m]; m++, l++, r++) ; if (l>=width || r>=height) continue; if (count<=condition[m]) break; if ((count+=badness[a[l]][b[r]])0) { for (count=stack[--x].c, m=stack[x].m, l=stack[x].i, r=stack[x].j; lcondition[m]; m++, l++, r++) ; if (l>=width || r>=height) continue; if (count<=condition[m]) break; if ((count+=badness[a[l]][b[r]])0) { for (count=stack[--x].c, m=stack[x].m, l=stack[x].i, r=stack[x].j; lcondition[m]; m++, l++, r++) ; if (l>=width || r>=height) continue; if (count<=condition[m]) break; if ((count+=badness[a[l]][b[r]])=0 && j>=0; i--, j--) if (badness[a[i]][b[j]]) { x=0; stack[x].i=i-1; stack[x].j=j-1; stack[x].m=0; stack[x++].c=0; while (x>0) { for (count=stack[--x].c, m=stack[x].m, l=stack[x].i, r=stack[x].j; l>=0 && r>=0 && badness[a[l]][b[r]]==0 && count>condition[m]; m++, l--, r--) ; if (l<0 || r<0) continue; if (count<=condition[m]) break; if ((count+=badness[a[l]][b[r]])=0 && r>=0 && count<=condition[m]) continue; x=0; stack[x].i=i-1; stack[x].j=j; stack[x].m=0; stack[x++].c=0; while (x>0) { for (count=stack[--x].c, m=stack[x].m, l=stack[x].i, r=stack[x].j; l>=0 && r>=0 && badness[a[l]][b[r]]==0 && count>condition[m]; m++, l--, r--) ; if (l<0 || r<0) continue; if (count<=condition[m]) break; if ((count+=badness[a[l]][b[r]])=0 && r>=0 && count<=condition[m]) { j++; continue; } x=0; stack[x].i=i; stack[x].j=j-1; stack[x].m=0; stack[x++].c=0; while (x>0) { for (count=stack[--x].c, m=stack[x].m, l=stack[x].i, r=stack[x].j; l>=0 && r>=0 && badness[a[l]][b[r]]==0 && count>condition[m]; m++, l--, r--) ; if (l<0 || r<0) continue; if (count<=condition[m]) break; if ((count+=badness[a[l]][b[r]])=0 && r>=0 && count<=condition[m]) { i++; continue; } break; } span=left+span-i-1; left=i+1; *start=left; *end=left+span-1; } lucy-1.20p/lucy-s/lucy.c0000644000245300000770000007266211057552136014343 0ustar mholmestigr/**************************************************************************** * * Copyright (c) 2003, The Institute for Genomic Research (TIGR), Rockville, * Maryland, U.S.A. All rights reserved. * ****************************************************************************/ #include #include #include #include #define TABLE_LENGTH 1023 #define BUFFER_LENGTH 4096 #define REPORT_FREQUENCY 50 #define RANGES 3 /* maximum number of splice sequences in splice file */ #define MAX_SPLICE_SEQS 40 #define newstring(len, str) (strcpy(malloc(sizeof(char)*(len)), (str))) typedef struct seq_struct { char *name; struct seq_struct *next; long spos, qpos; int len, left, right; struct range_struct { int left, right; } CLN, CLZ, CLB, CLV; } Seq; static int convert[128]={ -1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1, -1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1, -1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,15,-1,-1, -1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1,-1, /* @ A B C D E F G H I J K L M N O P Q R S T U V W X Y Z */ -1, 0,14, 1,11,-1,-1, 2,12,-1,-1,10,-1, 7,15,-1, -1,-1, 5, 9, 3, 4,13, 8,15, 6,-1,-1,-1,-1,-1,-1, -1, 0,14, 1,11,-1,-1, 2,12,-1,-1,10,-1, 7,15,-1, -1,-1, 5, 9, 3, 4,13, 8,15, 6,-1,-1,-1,-1,-1,-1}; /* variables defined in qual_trim.c */ #define MAX_NUMBER_OF_WINDOWS 20 extern int *conf_val_raw; extern int num_windows, windows[]; extern double err_limits[], max_avg_error, end_limit; /* variables defined in abi.c */ extern struct abi_struct { unsigned tag; int index; } *abi_well; extern struct hit_struct { int diff, count; } *hit_well; /* variables defined in vector.c */ extern int tag_size; /* variables defined in splice.c */ extern int *splice_match_base; extern int *splice_score_base; extern char *splice_direc_base; /* variables defined in poly.c */ extern int cdna, cerr, crng, keep; static char *program_name; void giveup(msg) char *msg; { fprintf(stderr, "%s: %s\n", program_name, msg); fprintf(stderr, "usage: %s\n" " [-pass_along min_value max_value med_value]\n" " [-range area1 area2 area3] [-alignment area1 area2 area3]\n" " [-vector vector_sequence_file splice_site_file]\n" " [-cdna [minimum_span maximum_error initial_search_range]] [-keep]\n" " [-size vector_tag_size] [-threshold vector_cutoff]\n" " [-minimum good_sequence_length] [-debug [filename]]\n" " [-output sequence_filename quality_filename]\n" " [-error max_avg_error max_error_at_ends]\n" " [-window window_size max_avg_error [window_size max_avg_error ...]]\n" " [-bracket window_size max_avg_error]\n" " [-quiet] [-inform_me]\n" " sequence_file quality_file [2nd_sequence_file]\n\n" "For more information try 'man -F lucy'.\n", program_name); exit(99); } void complain(msg) char *msg; { fprintf(stderr, "%s: %s\n", program_name, msg); } unsigned int hashstring(s) unsigned char *s; { register unsigned int value, g; register unsigned char *ptr; value=0; ptr = s; while (*ptr) { value = (value << 4) + *ptr; if (g = value&0xF0000000) { value = value ^ (g>>24); value = value ^ g; } ptr++; } return value; } static Seq *table[TABLE_LENGTH]; Seq *lookup(s) char *s; { register Seq *slot; slot = table[hashstring(s)%TABLE_LENGTH]; while (slot != NULL) { if (strcmp(s, slot->name)==0) return slot; else slot = slot->next; } return slot; } void insert(ptr) Seq *ptr; { register int i; i = hashstring(ptr->name)%TABLE_LENGTH; ptr->next=table[i]; table[i] = ptr; } main (argc, argv) int argc; char *argv[]; { register int i, j, bases, acc; register Seq *ptr; int title, count, max_bases, abi_max_bases, splice_bases[MAX_SPLICE_SEQS], splice_seqs, left, right, first, shift, saved; int c_min, c_max, c_med, range[3], match[3], threshold, minimum, debug, verbose, inform; int bracket_size; double bracket_err; Seq *seqs; char buf[BUFFER_LENGTH], buf2[BUFFER_LENGTH], *phred_seq, *abi_seq, *vec_seq, *splice_seq[MAX_SPLICE_SEQS], *tmp; char *seq_name, *qul_name, *abi_name, *vec_name, *spl_name; FILE *seq_file, *qul_file, *abi_file, *vec_file, *spl_file; char *seq_out_name, *qul_out_name, *debug_file_name; FILE *seq_out, *qul_out, *debug_file; /***************************************************************/ /* Phase 0.0: initialize file names, pointers, variables, etc. */ /***************************************************************/ seq_name=qul_name=abi_name=vec_name=spl_name=NULL; seq_file=qul_file=abi_file=vec_file=spl_file=NULL; program_name=argv[0]; c_min=c_max=c_med=0; range[0]=40; range[1]=60; range[2]=100; match[0]=8; match[1]=12; match[2]=16; tag_size=10; threshold=20; minimum=100; debug=0; verbose=1; inform=0; cdna=keep=0; seq_out_name="lucy.seq"; qul_out_name="lucy.qul"; debug_file_name="lucy.debug"; num_windows = 0; /*******************************************/ /* Phase 0.1: parse command line arguments */ /*******************************************/ for (i=1; i=MAX_NUMBER_OF_WINDOWS) giveup("maximum number of -window option pairs exceeded"); windows[num_windows]=atoi(argv[++i]); if (windows[num_windows]<=0) giveup("invalid window size for -window options"); if (num_windows && windows[num_windows]>windows[num_windows-1]) giveup("sizes must be in decreasing order for -window options"); if (!isdigit(argv[i+1][0]) && argv[i+1][0]!='.') giveup("incorrect number of -window options"); err_limits[num_windows]=atof(argv[++i]); if (err_limits[num_windows]>1.0||err_limits[num_windows]<0.0) giveup("invalid probability values for -window options"); } if (num_windows<=0) giveup("incorrect number of -window options"); break; case 'e': if ((i+2)1.0 || max_avg_error<0.0 || end_limit>1.0 || end_limit<0.0) giveup("invalid probability values for -error options"); } else giveup("incorrect number of -error options"); break; case 'b': if ((i+2)1.0 || bracket_err<0.0 || bracket_size<=0) giveup("invalid values for -bracket option"); } else giveup("incorrect number of -bracket options"); set_bracket(bracket_size, bracket_err); break; case 'p': if ((i+3)16 || tag_size<8) giveup("invalid tag size; must be between 8 to 16"); break; case 't': if ((i+1)' && !isspace(buf[1])) { count++; if (verbose && count%REPORT_FREQUENCY==0) fprintf(stderr, "%d\r", count); } if (count<=0) giveup("input sequence file has no sequence data"); if (verbose) fprintf(stderr, " %d input sequences found.\n", count); /* allocate sequence array for information gathering */ seqs=(Seq*)calloc(count, sizeof(Seq)); /*********************************************************************/ /* Phase 2: read sequence name, length and file position information */ /*********************************************************************/ if (verbose) fprintf(stderr, "Phase 2: Reading sequence name, length and position data...\n"); /* initial value of max_bases is the sum of the alignment ranges */ for (i=max_bases=0; i%s in input sequence file", seqs[i].name); giveup(buf); } insert(&seqs[i]); seqs[i].spos=ftell(seq_file); seqs[i].qpos=-1; for (bases=0; fgets(buf, BUFFER_LENGTH, seq_file) && buf[0]!='>'; ) { for (j=0; buf[j] && !isspace(buf[j]); j++) if (convert[buf[j]&0x7F]<0) { sprintf(buf, "invalid character %c for >%s in sequence file", buf[j], seqs[i].name); giveup(buf); } bases+=j; } if ((seqs[i].len=bases)<=0) acc++; if (bases>max_bases) max_bases=bases; if (verbose && i%REPORT_FREQUENCY==0) fprintf(stderr, "%d\r", i); } if (verbose) fprintf(stderr, " %d empty sequences discarded.\n", acc); /**********************************************************/ /* Phase 3: determine good quality range based on average */ /* probability of error. */ /**********************************************************/ /* allocate appropriate data structures for grim.c/range() */ conf_val_raw=(int*)malloc(sizeof(int)*max_bases); /* read in quality values, determine clear range for each sequence */ if (verbose) fprintf(stderr, "Phase 3: Reading quality values and checking good" " sequence regions...\n"); while ((tmp=fgets(buf, BUFFER_LENGTH, qul_file)) && buf[0]!='>') ; for (title=i=acc=0; tmp; i++) { for (j=1; buf[j] && !isspace(buf[j]); j++) ; buf[j]='\0'; if ((ptr=lookup(&buf[1]))==NULL) { if (title==0) { complain("the quality inputs below (except dropped) " "have no counterpart in the sequence file"); title=1; } complain(buf); while ((tmp=fgets(buf, BUFFER_LENGTH, qul_file)) && buf[0]!='>') ; continue; } ptr->qpos=ftell(qul_file); for (j=0; jlen; j++) if (fscanf(qul_file, "%d", &conf_val_raw[j])!=1) { sprintf(buf, "invalid/mismatch quality input for sequence >%s", ptr->name); giveup(buf); } if (j) fgets(buf, BUFFER_LENGTH, qul_file); if ((tmp=fgets(buf, BUFFER_LENGTH, qul_file)) && buf[0]!='>') { sprintf(buf, "invalid/mismatch quality input for sequence >%s", ptr->name); giveup(buf); } if (j) { /* trim the sequence (determine clean range based on quality) */ quality_trim(conf_val_raw, j, minimum, &(ptr->left), &(ptr->right)); if (ptr->left>=ptr->right) { ptr->CLN.left=0; ptr->CLN.right=0; acc++; if (verbose && inform) { sprintf(buf2, "==> dropping %s", ptr->name); complain(buf2); } } else { ptr->CLN.left=ptr->left+1; ptr->CLN.right=ptr->right+1; } } if (verbose && i%REPORT_FREQUENCY==0) fprintf(stderr, "%d\r", i); } if (verbose) fprintf(stderr, " %d quality sequences read; " "%d low quality sequences dropped.\n", i, acc); /* deallocate data structures for grim.c/range() */ free(conf_val_raw); /*******************************************************************/ /* Phase 4: compare Phred base calls to ABI base calls if provided */ /*******************************************************************/ if (abi_file) { if (verbose) fprintf(stderr, "Phase 4: Comparing to 2nd sequence file...\n"); /* allocate arrays for abi.c/abi_align() */ prepare_abi_mask(); phred_seq=(char*)malloc(sizeof(char)*max_bases); abi_well=(struct abi_struct*)malloc(sizeof(struct abi_struct)*max_bases); hit_well=(struct hit_struct*)malloc(sizeof(struct hit_struct)*max_bases); abi_max_bases=max_bases+BUFFER_LENGTH; abi_seq=(char*)malloc(sizeof(char)*abi_max_bases); while ((tmp=fgets(buf, BUFFER_LENGTH, abi_file)) && buf[0]!='>') ; for (saved=title=i=acc=0; tmp; i++) { for (j=1; buf[j] && !isspace(buf[j]); j++) ; buf[j]='\0'; if ((ptr=lookup(&buf[1]))==NULL) { if (title==0) { complain("the 2nd sequences below (except salvaged) " "are not found in the first sequence file"); title=1; } complain(buf); while ((tmp=fgets(buf, BUFFER_LENGTH, abi_file)) && buf[0]!='>') ; continue; } if (ptr->len>0) { fseek(seq_file, ptr->spos, SEEK_SET); for (bases=0; fgets(buf, BUFFER_LENGTH, seq_file) && buf[0]!='>'; ) for (j=0; buf[j] && !isspace(buf[j]); j++) phred_seq[bases++]=convert[buf[j]&0x7F]; if (bases!=ptr->len) giveup("how can bases!=ptr->len happen in Phase 4? " "Report to programmer!"); } for (bases=0; (tmp=fgets(buf, BUFFER_LENGTH, abi_file)) && buf[0]!='>'; ) for (j=0; buf[j] && !isspace(buf[j]); j++) { if (bases>=abi_max_bases) { abi_max_bases += BUFFER_LENGTH; abi_seq=realloc(abi_seq, sizeof(char)*abi_max_bases); } if ((abi_seq[bases++]=convert[buf[j]&0x7F])<0) { sprintf(buf, "invalid character %c for >%s in 2nd sequence file", buf[j], ptr->name); giveup(buf); } } if (ptr->len>0) { abi_align(phred_seq, ptr->len, abi_seq, bases, &left, &right); if (left>=right) { ptr->CLZ.left=0; ptr->CLZ.right=0; } else { ptr->CLZ.left=left+1; ptr->CLZ.right=right+1; } if (right-left>minimum) { if (ptr->left>=ptr->right) { saved++; acc++; ptr->left=left; ptr->right=right; if (verbose && inform) { sprintf(buf2, "<== saving %s", ptr->name); complain(buf2); } } else if (leftleft) { ptr->left=left; acc++; if (right>ptr->right) ptr->right=right; } else if (right>ptr->right) { ptr->right=right; acc++; } } } if (verbose && i%REPORT_FREQUENCY==0) fprintf(stderr, "%d\r", i); } if (verbose) fprintf(stderr, " %d 2nd sequences compared;" " %d sequences extended.\n", i, acc); if (verbose && saved) fprintf(stderr, " %d low quality sequences salvaged.\n", saved); /* deallocate dynamic programming matrix for abi.c/abi_align() */ free(abi_seq); free(hit_well); free(abi_well); free(phred_seq); } else if (verbose) fprintf(stderr, "Phase 4: 2nd sequences comparsion skipped...\n" " no 2nd sequence file provided.\n"); /* update CLB information */ for (i=0; i=seqs[i].right) { seqs[i].CLB.left=0; seqs[i].CLB.right=0; } else { seqs[i].CLB.left=seqs[i].left+1; seqs[i].CLB.right=seqs[i].right+1; } } /***********************************************/ /* Phase 5: locate splice sites on sequences */ /***********************************************/ if (spl_file) { if (verbose) fprintf(stderr, "Phase 5: Locating splice sites..."); /* making match array */ for (i=bases=0; ifirst ? first : seqs[i].len, splice_seq[j], splice_bases[j], 0, first, &right); if (seqs[i].left>first) { shift = seqs[i].left; splice_align_left(phred_seq+shift-match[RANGES-1], (seqs[i].len>shift+range[RANGES-1]) ? (range[RANGES-1]+match[RANGES-1]) : (seqs[i].len-shift+match[RANGES-1]), splice_seq[j], splice_bases[j], shift-match[RANGES-1], seqs[i].left, &saved); if (saved>right) right=saved; shift += range[RANGES-1]; } else if (right<0 && seqs[i].len>first) { shift = first; splice_align_left(phred_seq+shift-match[RANGES-1], (seqs[i].len>shift+range[RANGES-1]) ? (range[RANGES-1]+match[RANGES-1]) : (seqs[i].len-shift+match[RANGES-1]), splice_seq[j], splice_bases[j], shift-match[RANGES-1], seqs[i].left, &right); shift += range[RANGES-1]; } else shift = first; for (; right+1>=shift && seqs[i].len>shift; shift+=range[RANGES-1]) { splice_align_left(phred_seq+shift-match[RANGES-1], (seqs[i].len>shift+range[RANGES-1]) ? (range[RANGES-1]+match[RANGES-1]) : (seqs[i].len-shift+match[RANGES-1]), splice_seq[j], splice_bases[j], shift-match[RANGES-1], shift, &saved); if (saved>right) right=saved; } if (right>=0) { if (right+2>seqs[i].CLV.left) seqs[i].CLV.left=right+2; if (right>=seqs[i].left) seqs[i].left=right+1; } if (seqs[i].left<=seqs[i].right-minimum) { splice_align_right(phred_seq+seqs[i].left, seqs[i].right-seqs[i].left+1, splice_seq[j+1], splice_bases[j+1], seqs[i].left, match[RANGES-1], &left); if (left<0 && seqs[i].right=seqs[i].len) right=seqs[i].len-1; splice_align_right(phred_seq+left, right-left+1, splice_seq[j+1], splice_bases[j+1], left, match[RANGES-1], &left); } if (left>=0) { if (seqs[i].CLV.right<=0 || left=0; i--) free(splice_seq[i]); free(splice_match_base); } /*************************************************/ /* Phase 5a: identify poly-A/T ends on sequences */ /*************************************************/ if (cdna) { if (verbose) fprintf(stderr, "Phase 5a: Identifying Poly-A/T ends...\n"); /* identifying poly-A/T ends for each sequence */ phred_seq=(char*)malloc(sizeof(char)*max_bases); for (i=acc=0; ilen happen in Phase 6?" " Report to programmer!"); bases=seqs[i].right-seqs[i].left+1; j=match_vector_tags(phred_seq+seqs[i].left, bases); if (bases-jthreshold) { seqs[i].left=seqs[i].right=0; acc++; } } if (verbose && i%REPORT_FREQUENCY==0) fprintf(stderr, "%d\r", i); } if (verbose) fprintf(stderr, " %d vector sequences discarded.\n", acc); free(phred_seq); destroy_vector_tags(); } /******************************************************/ /* Phase 7: produce output sequence and quality files */ /******************************************************/ if (verbose) fprintf(stderr, "Phase 7: Producing output sequence and quality files...\n"); seq_out=fopen(seq_out_name, "w"); qul_out=fopen(qul_out_name, "w"); for (title=i=acc=0; i%s", seqs[i].name); complain(buf); } else if (seqs[i].left < seqs[i].right) { sprintf(buf, ">%s %d %d %d %d %d\n", seqs[i].name, c_min, c_max, c_med, seqs[i].left+1, seqs[i].right+1); fputs(buf, seq_out); sprintf(buf, ">%s\n", seqs[i].name); fputs(buf, qul_out); fseek(seq_file, seqs[i].spos, SEEK_SET); while (fgets(buf, BUFFER_LENGTH, seq_file) && buf[0]!='>') fputs(buf, seq_out); fseek(qul_file, seqs[i].qpos, SEEK_SET); while (fgets(buf, BUFFER_LENGTH, qul_file) && buf[0]!='>') fputs(buf, qul_out); acc++; } if (verbose && i%REPORT_FREQUENCY==0) fprintf(stderr, "%d\r", i); } if (verbose) fprintf(stderr, " %d good sequences written in" " %s and %s.\n", acc, seq_out_name, qul_out_name); fclose(seq_out); fclose(qul_out); if (debug) { debug_file=fopen(debug_file_name, "w"); for (i=0; i=cdna) break; } else ttt=0; if (i>=crng || i>=len) /* found nothing within 'crng', return nil */ return pos; if (keep) /* keep the poly-T tag for identification purpose */ return i-ttt+1; /* extend span of poly-T within 'cerr' error tolerance */ for (i++, seq++, err=0; i=cdna) err=0; } else { if (err<=0) pos=i; err++; ttt=0; if (err>cerr) return pos; } return len; } int poly_at_right(seq, len) char *seq; int len; { register int i, err, aaa, pos; /* find the last 'cdna' number of connected A's in the last 'crng' bases of the input sequence */ for (i=pos=aaa=0; i=cdna) break; } else aaa=0; if (i>=crng || i>=len) /* found nothing within 'crng', return nil */ return pos; if (keep) /* keep the poly-A tag for identification purpose */ return i-aaa+1; /* extend span of poly-A within 'cerr' error tolerance */ for (i++, seq--, err=0; i=cdna) err=0; } else { if (err<=0) pos=i; err++; aaa=0; if (err>cerr) return pos; } return len; } lucy-1.20p/lucy-s/qual_trim.c0000644000245300000770000005726607651005011015355 0ustar mholmestigr/**************************************************************************** * * Copyright (c) 2003, The Institute for Genomic Research (TIGR), Rockville, * Maryland, U.S.A. All rights reserved. * ****************************************************************************/ /**************************************************************************/ /* /* qual_trim.c - Quality trimming algorithm which determines a "clean" /* range for a sequence based on its phred quality values. /* /* Written by Michael Holmes, 4/13/99. /* /* 1/31/2000, Michael Holmes -- Added default_windows(). /* 2/15/2000, Michael Holmes -- Added bracket_clean_range() and /* set_bracket(). /* 2/18/2000, Michael Holmes -- Minor change to test-mode output only. /* /* Copyright (C) 1999, 2000, The Institute for Genomic Research. All rights /* reserved. /* /* Note: phred quality values are based on the log (base 10) of the /* probability that the corresponding base call is in error: /* /* Q = -10 log(P_error) /* /* Thanks to Granger Sutton for valuable suggestions. /* /* The main functions of interest to external code (such as lucy) are /* default_windows() and quality_trim(). The grim() function emulates the /* interface that was used by the old quality trimmimg algorithm (grim), /* but it is not called by lucy. The main() function is compiled only if /* TEST_THIS_CODE is #defined. /* /* The calling hierarchy is: /* /* main() /* grim() /* default_windows() /* quality_trim() /* bracket_clean_range() /* multi_window_trim() /* window_trim() /* multi_window_trim() [recursive call] /* average_error_trim() /* /**************************************************************************/ #include #include #include #include /* the highest quality value for which we have computed the */ /* corresponding probability of error */ #define MAX_QUALITY 99 /* Note: the max number of windows is 20 */ #define MAX_NUMBER_OF_WINDOWS 20 /* default for maximum average probability of error */ #define DEFAULT_ERROR_THRESHOLD 0.025 /* default for maximum probability of error at each end of clean range */ #define DEFAULT_END_LIMIT 0.02 /* default window size for terminal windows */ #define DEFAULT_BRACKET_WINDOW 10 /* default max average error in terminal windows */ #define DEFAULT_BRACKET_ERROR 0.02 #define TRUE 1 #define FALSE 0 #define max(a,b) (((a) > (b)) ? (a): (b)) #define min(a,b) (((a) < (b)) ? (a): (b)) /* global variables and arrays: */ /* probability of base call error for phred quality values */ /* from 0 to 99 (indexed by quality) */ double perr[] = { 1.000000e+00, 7.943282e-01, 6.309573e-01, 5.011872e-01, 3.981072e-01, 3.162278e-01, 2.511886e-01, 1.995262e-01, 1.584893e-01, 1.258925e-01, 1.000000e-01, 7.943282e-02, 6.309573e-02, 5.011872e-02, 3.981072e-02, 3.162278e-02, 2.511886e-02, 1.995262e-02, 1.584893e-02, 1.258925e-02, 1.000000e-02, 7.943282e-03, 6.309573e-03, 5.011872e-03, 3.981072e-03, 3.162278e-03, 2.511886e-03, 1.995262e-03, 1.584893e-03, 1.258925e-03, 1.000000e-03, 7.943282e-04, 6.309573e-04, 5.011872e-04, 3.981072e-04, 3.162278e-04, 2.511886e-04, 1.995262e-04, 1.584893e-04, 1.258925e-04, 1.000000e-04, 7.943282e-05, 6.309573e-05, 5.011872e-05, 3.981072e-05, 3.162278e-05, 2.511886e-05, 1.995262e-05, 1.584893e-05, 1.258925e-05, 1.000000e-05, 7.943282e-06, 6.309573e-06, 5.011872e-06, 3.981072e-06, 3.162278e-06, 2.511886e-06, 1.995262e-06, 1.584893e-06, 1.258925e-06, 1.000000e-06, 7.943282e-07, 6.309573e-07, 5.011872e-07, 3.981072e-07, 3.162278e-07, 2.511886e-07, 1.995262e-07, 1.584893e-07, 1.258925e-07, 1.000000e-07, 7.943282e-08, 6.309573e-08, 5.011872e-08, 3.981072e-08, 3.162278e-08, 2.511886e-08, 1.995262e-08, 1.584893e-08, 1.258925e-08, 1.000000e-08, 7.943282e-09, 6.309573e-09, 5.011872e-09, 3.981072e-09, 3.162278e-09, 2.511886e-09, 1.995262e-09, 1.584893e-09, 1.258925e-09, 1.000000e-09, 7.943282e-10, 6.309573e-10, 5.011872e-10, 3.981072e-10, 3.162278e-10, 2.511886e-10, 1.995262e-10, 1.584893e-10, 1.258925e-10 }; /* number of windows for window trimming */ int num_windows = 3; /* the window sizes, and max allowed average probability of error in window */ /* Note: the max number of windows is 20 */ int windows[MAX_NUMBER_OF_WINDOWS]; double err_limits[MAX_NUMBER_OF_WINDOWS]; /* the maximum allowed average probability of error over the entire clean range */ double max_avg_error = DEFAULT_ERROR_THRESHOLD; /* the maximum allowed probability of error for the 2 bases at the left and right */ /* ends of the clean range */ double end_limit = DEFAULT_END_LIMIT; /* the terminal window size and allowable error used to do an initial */ /* trim of low-quality base calls from each end of sequence */ double bracket_error = DEFAULT_BRACKET_ERROR; int bracket_window = DEFAULT_BRACKET_WINDOW; /* these globals are necessary so that my "grim" function can */ /* simulate the old "grim" function */ int *conf_val_raw; /**************************************************************************/ /* /* Determines some number of candidate clean ranges using a particular /* window size. /* /* Globals used: /* double end_limit, (maximum allowed probability of error for bases) /* ( at each end of clean range) /* */ void window_trim( double *prob_err, /* array of phred error probabilities */ int length, /* number of probabilities (length of sequence) */ double err_limit, /* maximum allowed average probability of error in window */ int window, /* window size */ int min_frag_length, /* minimum acceptable fragment size */ int *num_ranges, /* number of separate clean ranges found */ int *range_start, /* caller-allocated array for storage of range */ /* start values (0..length - 1) */ int *range_end /* caller-allocated array for storage of range */ /* end values (0..length - 1) */ ) { register double win_limit, win_err; register int lidx, ridx, win_idx, end_idx; int i; int range_idx; /* initialize number of clean ranges */ *num_ranges = 0; /* length of sequence must be at least the window size */ if (length < window || length < min_frag_length) return; /* calculate max allowable cumulative error for window */ win_limit = err_limit * (double)window; /* calculate cumulative error for first window */ for (i = 0, win_err = 0.0; i < window; i++) win_err += prob_err[i]; /* initialize index to storage of candidate clean ranges */ range_idx = 0; /* initialize left, right indices for next clean range */ lidx = ridx = -1; /* initialize window beginning and end indices */ win_idx = 0; end_idx = window - 1; /* look at each window in turn */ while (end_idx < length) { /* is current window's cumulative error probability OK ? */ if (win_err <= win_limit) { /* yes, mark the start of a clean range if we're */ /* not already in one, and if the first base of window */ /* has acceptable error probability */ if (lidx < 0 && prob_err[win_idx] <= end_limit) { lidx = win_idx; } /* if we're in a clean range and last base of window */ /* has acceptable error probability, mark it as the */ /* provisional end of the still-expanding clean range */ if (lidx >= 0 && prob_err[end_idx] <= end_limit) { ridx = end_idx; } } else { /* no, is this the end of a clean range ? */ if (lidx >= 0 && ridx >= 0 && (ridx - lidx + 1) >= min_frag_length) { /* yes, save clean range start and end */ /* as base indices (0..length-1) */ range_start[range_idx] = lidx; range_end[range_idx] = ridx; /* increment clean range index */ range_idx++; } /* mark the fact that we're not within a clean range */ lidx = ridx = -1; } /* advance the window */ win_err -= prob_err[win_idx]; win_idx++; end_idx++; /* (Note: here's why we allocated one extra cell in prob_err array) */ win_err += prob_err[end_idx]; } /* were we inside a clean range at end of while loop ? */ if (lidx >= 0 && ridx >= 0 && (ridx - lidx + 1) >= min_frag_length) { /* yes, save clean range start and end */ /* as base indices (0..length-1) */ range_start[range_idx] = lidx; range_end[range_idx] = ridx; /* increment clean range index */ range_idx++; } /* store number of clean ranges found for caller */ *num_ranges = range_idx; } /* window_trim() */ /**************************************************************************/ /* /* Finds the largest subsequence of a sequence whose average probability /* of error does not exceed a specified maximum. /* /* Globals used: /* double max_avg_error, (maximum allowed average probability of error) /* double end_limit, (maximum allowed probability of error for bases) /* ( at each end of clean range) /* */ void average_error_trim( double *prob_err, /* array of phred error probabilities */ int length, /* number of quality values (length of sequence) */ int min_frag_length, /* minimum acceptable clean fragment length */ int *cln_left, /* base index (0..length-1) of start of clean range */ int *cln_right /* base index (0..length-1) of end of clean range */ ) { int i, j, frag_length; int diag_count; int done; double *diag, this_err; /* initialize caller's clean range */ *cln_left = *cln_right = 0; /* if sequence is too short, we're done */ if (length < min_frag_length) return; /* allocate space for cumulative error values on the diagonal */ diag = (double *)malloc((size_t)(length + 1) * sizeof(double)); if (diag == NULL) { fprintf(stderr, "Memory allocation failure in find_largest_clean_range.\n"); exit(1); } /* calculate the single diagonal value for corner of matrix */ /* (corresponding to the full-length sequence) */ for (i = 0, *diag = 0.0; i < length; i++) { *diag += prob_err[i]; } frag_length = length; done = FALSE; while (frag_length >= min_frag_length && !done) { /* calculate cumulative error of last cell on next diagonal */ diag_count = length - frag_length + 1; diag[diag_count] = diag[diag_count - 1] - prob_err[diag_count - 1]; /* consider each value on this diagonal */ for (i = 0, j = frag_length - 1; j < length; i++, j++) { /* calculate average error of bases i..j */ this_err = diag[i] / (double)frag_length; /* is it good enough ? */ if (this_err <= max_avg_error) { /* yes, this is our clean range */ *cln_left = i; *cln_right = j; done = TRUE; break; } else { /* for next diagonal, subtract out error of last base in range */ diag[i] -= prob_err[j]; } } /* decrement fragment length of next diagonal */ frag_length--; } /* make sure the ends of the clean range are OK */ if (*cln_right > 0) { while (prob_err[*cln_left] > end_limit) (*cln_left)++; while (prob_err[*cln_right] > end_limit) (*cln_right)--; } /* check fragment length */ if (*cln_right - *cln_left + 1 < min_frag_length) { *cln_left = *cln_right = 0; } /* free allocated array */ free(diag); } /* average_error_trim() */ /**************************************************************************/ /* /* Determines a single clean range, after recursively considering all of /* the specified window sizes. Calls average_error_trim to trim the /* results of the final window based on overall average probability of /* error. /* /* Globals used: /* double max_avg_error, (maximum allowed average probability of error) /* double end_limit, (maximum allowed probability of error for bases) /* ( at each end of clean range) /* */ void multi_window_trim( double *prob_err, /* array of phred error probabilities */ int length, /* number of quality values (length of sequence) */ int num_windows, /* number of windows */ int *windows, /* array of window sizes (largest to smallest) */ double *err_limits, /* array of maximum allowed average probability */ /* for each window size */ int min_frag_length, /* the minimum acceptable length of a fragment */ int *cln_left, /* base index (0..length-1) of start of clean range */ int *cln_right /* base index (0..length-1) of end of clean range */ ) { int *range_start, *range_end; int num_ranges, left, right, i, max_clean; /* initialize caller's clean range */ *cln_left = *cln_right = 0; /* allocate space for start and end of each candidate clean range */ range_start = (int *)malloc((size_t)(length + 1) * sizeof(int)); if (range_start == NULL) { fprintf(stderr, "Memory allocation failure in multi_window_trim.\n"); exit(1); } range_end = (int *)malloc((size_t)(length + 1) * sizeof(int)); if (range_end == NULL) { fprintf(stderr, "Memory allocation failure in multi_window_trim.\n"); exit(1); } /* trim sequence to largest window size */ window_trim(prob_err, length, err_limits[0], windows[0], min_frag_length, &num_ranges, range_start, range_end); /* any clean ranges found ? */ if (num_ranges > 0) { #ifdef TEST_THIS_CODE if (num_windows == 3) fprintf(stderr, "Ranges: "); #endif /* yes, any smaller windows to be dealt with ? */ if (num_windows > 1) { /* yes, trim each candidate clean range by the smaller windows */ for (i = 0; i < num_ranges; i++) { /* recursive call */ multi_window_trim( prob_err + range_start[i], range_end[i] - range_start[i] + 1, num_windows - 1, windows + 1, err_limits + 1, min_frag_length, &left, &right); if (right > 0) { range_end[i] = right + range_start[i]; range_start[i] = left + range_start[i]; } else { range_start[i] = range_end[i] = 0; } } } else { /* no, trim each of the bottom-level ranges based on average quality */ for (i = 0; i < num_ranges; i++) { average_error_trim(prob_err + range_start[i], range_end[i] - range_start[i] + 1, min_frag_length, &left, &right); if (right > 0) { range_end[i] = right + range_start[i]; range_start[i] = left + range_start[i]; } else { range_start[i] = range_end[i] = 0; } } } #ifdef TEST_THIS_CODE if (num_windows == 1) { for (i = 0; i < num_ranges; i++) if (range_end[i] > 0) fprintf(stderr, "%d ", range_end[i] - range_start[i] + 1); } else if (num_windows == 3) fprintf(stderr, "\n"); #endif /* find the largest clean range */ max_clean = -1; for (i = 0; i < num_ranges; i++) { if (range_end[i] > 0 && range_end[i] - range_start[i] > max_clean) { max_clean = range_end[i] - range_start[i]; *cln_left = range_start[i]; *cln_right = range_end[i]; } } } /* free allocated arrays */ free(range_start); free(range_end); } /* multi_window_trim() */ /**************************************************************************/ /* /* Sets the window size and average probability of error allowed for the /* terminal windows that "bracket" the candidate clean range. /* /* Globals used: /* int bracket_window, (size of terminal window) /* double bracket_error (allowable average prob. error in window) /* */ void set_bracket(int window_size, double max_error) { bracket_window = window_size; bracket_error = max_error; } /* set_bracket() */ /**************************************************************************/ /* /* Finds the leftmost window, and the rightmost window, which meet the /* specified error criterion. The purpose of this function is to bracket /* the portion of the sequence that is of decent quality -- i.e. to /* eliminate the really bad quality stuff that is often found on either /* end. The beginning of the first matching window, and the end of the /* last, bracket the sequence range that will be looked at to find the /* final clean range. /* /* This function is called before the multi_window_trim function, and /* its results are used to limit the range of sequence that will be /* considered by that function. /* */ void bracket_clean_range( double *prob_err, /* array of phred error probabilities */ int length, /* number of quality values (length of sequence) */ int window_len, /* size of window */ double max_err, /* maximum allowable average error in window */ int min_frag_length, /* the minimum acceptable length of a fragment */ int *cln_left, /* base index (0..length-1) of start of clean range */ int *cln_right /* base index (0..length-1) of end of clean range */ ) { int left, right; int i, j; double cum_error, max_cum_error; /* initialize caller's clean range */ *cln_left = *cln_right = 0; /* initialize my left and right brackets */ left = right = -1; /* calculate cumulative allowable error in window */ max_cum_error = (double)window_len * max_err; /* calculate cumulative error in first window */ for (i = 0, cum_error = 0.0; i < window_len; i++) { cum_error += prob_err[i]; } /* test first window */ if (cum_error <= max_cum_error) { /* it passes, set left and right brackets */ left = 0; right = window_len - 1; } /* test the remaining windows */ /* i is index to beginning of previous window */ /* j is index to end of current window */ for (i = 0, j = window_len; j < length; i++, j++) { /* calculate cumulative error in this window */ cum_error = cum_error - prob_err[i] + prob_err[j]; /* test window */ if (cum_error <= max_cum_error) { /* window passes */ /* leave left bracket alone if it's already set */ if (left < 0) { /* set left bracket to start of current window */ left = i + 1; } /* set right bracket to end of current window */ right = j; } } /* did we bracket a sequence of sufficient length ? */ if (right > 0 && (right - left + 1) >= min_frag_length) { /* yes, set caller's clean range variables */ *cln_left = left; *cln_right = right; } #ifdef TEST_THIS_CODE fprintf(stderr, "Bracket: %d %d\n", *cln_left, *cln_right); #endif } /* bracket_clean_range() */ /**************************************************************************/ /* /* Determines the clean range. Calls multi_window_trim, which calls both /* window_trim and average_error_trim. /* /* Globals used: /* int num_windows, (number of windows) /* int *windows, (array of window sizes (largest to smallest)) /* double *err_limits, (array of maximum allowed average probability) /* ( for each window size) /* double max_avg_error, (maximum allowed average probability of error) /* double end_limit, (maximum allowed probability of error for bases) /* ( at each end of clean range) /* int bracket_window, (size of terminal window) /* double bracket_error (allowable average prob. error in window) /* */ void quality_trim( int *quality, /* array of phred quality values */ int length, /* number of quality values (length of sequence) */ int min_frag_length, /* minimum acceptable clean fragment length */ int *cln_left, /* base index (0..length-1) of start of clean range */ int *cln_right /* base index (0..length-1) of end of clean range */ ) { int i, q; int left, right; int min_left, max_right; double *prob_err; double err, sum; /* initialize caller's clean range */ *cln_left = *cln_right = 0; /* if sequence is too short, we're done */ if (length < min_frag_length) return; /* allocate space for error probabilities */ /* (allocate length + 1 locations for computational convenience) */ prob_err = (double *)malloc((size_t)(length + 1) * sizeof(double)); if (prob_err == NULL) { fprintf(stderr, "Memory allocation failure in quality_trim.\n"); exit(1); } /* convert qualities to error probabilities */ for (i = 0; i < length; i++) { q = quality[i]; if (q > MAX_QUALITY) q = MAX_QUALITY; prob_err[i] = perr[q]; } /* set the extra value at end of array */ prob_err[length] = 0.0; /* find beginning and end of reasonable-quality sequence */ left = right = 0; bracket_clean_range(prob_err, length, bracket_window, bracket_error, min_frag_length, &min_left, &max_right); if (max_right > 0) { /* find largest sequence that matches all our window criteria */ multi_window_trim(prob_err + min_left, max_right - min_left + 1, num_windows, windows, err_limits, min_frag_length, &left, &right); if (right > 0) { left = left + min_left; right = right + min_left; } } if (right > 0 && (right - left + 1) >= min_frag_length) { /* store clean range for caller */ *cln_left = left; *cln_right = right; } #ifdef TEST_THIS_CODE if (right > 0) { /* calculate the probability of error of the final clean range */ for (i = left, sum = 0.0; i <= right; i++) { sum += prob_err[i]; } err = sum / (double)(right - left + 1); if (err > max_avg_error) { /* error -- this shouldn't happen */ fprintf(stderr, "*** Error: %lf %lf\n", err, max_avg_error); } } #endif /* free allocated array */ free(prob_err); } /* quality_trim() */ /**************************************************************************/ /* /* Sets up 3 windows for quality trimming, with the average error allowed /* in each window calculated from max_avg_error. /* /* Globals used: /* int num_windows, (number of windows) /* int *windows, (array of window sizes (largest to smallest)) /* double *err_limits, (array of maximum allowed average probability) /* (for each window size) /* double max_avg_error, (maximum allowed average probability of error) /* */ void default_windows(void) { /* 3 fixed window sizes: 100, 30, 5 */ num_windows = 2; windows[0] = 50; windows[1] = 10; /* error criteria for windows are looser than for full-length */ /* clean range */ /* err_limits[0] = (5.0 + 95.0 * max_avg_error) / 100.0; err_limits[1] = (3.0 + 27.0 * max_avg_error) / 30.0; err_limits[2] = (1.0 + 4.0 * max_avg_error) / 5.0; */ err_limits[0] = 0.08; err_limits[1] = 0.3; } /* default_windows() */ /**************************************************************************/ /* /* Simulates the functionality of the old grim() function, by calling /* quality_trim(). /* /* Globals used: /* int num_windows, (number of windows) /* int *windows, (array of window sizes (largest to smallest)) /* double *err_limits, (array of maximum allowed average probability) /* (for each window size) /* double max_avg_error, (maximum allowed average probability of error) /* double end_limit, (maximum allowed probability of error for bases) /* ( at each end of clean range) /* */ void grim(int length, int *left, int *right) { /* set up windows for quality trimming */ default_windows(); /* the full-length clean range must have an average probability */ /* of error no greater than max_avg_error */ quality_trim( conf_val_raw, /* the raw quality values */ length, /* length of sequence */ 100, /* minimum acceptable clean range length */ left, /* pointer to caller's start index */ right /* pointer to caller's end index */ ); } /* grim() */ #ifdef TEST_THIS_CODE /**************************************************************************/ void main(int argc, char **argv) { int quality[10000]; int qual_count, length, i; int left, right; char line_buff[4096], seq_name[80], *sptr; if (argc > 1) { max_avg_error = atof(argv[1]); } if (argc > 2) { end_limit = atof(argv[2]); } /* read first line and get seq name */ fgets(line_buff, 4096, stdin); sptr = strtok(line_buff, "> \t\r\n"); if (sptr == NULL) { exit(1); } strcpy(seq_name, sptr); /* read remaining lines and populate quality values array */ i = 0; while (fgets(line_buff, 4096, stdin) != NULL) { sptr = strtok(line_buff, " \t\r\n"); while (sptr != NULL) { quality[i++] = atoi(sptr); sptr = strtok(NULL, " \t\r\n"); } } qual_count = i; /* trim for quality */ conf_val_raw = quality; grim(qual_count, &left, &right); if (right > 0) { left++; right++; } /* display seq name and clean range */ if (right - left < 99) left = right = 0; printf("%s\tCLN\t%d\t%d\n", seq_name, left, right); exit(0); } /* main() */ #endif lucy-1.20p/lucy-s/splice.c0000644000245300000770000001563707651005015014637 0ustar mholmestigr/**************************************************************************** * * Copyright (c) 2003, The Institute for Genomic Research (TIGR), Rockville, * Maryland, U.S.A. All rights reserved. * ****************************************************************************/ #define NIL 0 #define LFT 1 #define DIA 2 #define TOP 3 #define Score(x, y) splice_score_base[(y)*width+(x)] #define Direc(x, y) splice_direc_base[(y)*width+(x)] int *splice_match_base; int *splice_score_base; char *splice_direc_base; static int match[16][16]={ /* A C G T U R Y M W S K D H V B N */ /*A*/ { 5,-14,-14,-14,-14, 2,-14, 2, 2,-14,-14, 1, 1, 1,-14, 0,}, /*C*/ {-14, 5,-14,-14,-14,-14, 2, 2,-14, 2,-14,-14, 1, 1, 1, 0,}, /*G*/ {-14,-14, 5,-14,-14, 2,-14,-14,-14, 2, 2, 1,-14, 1, 1, 0,}, /*T*/ {-14,-14,-14, 5, 5,-14, 2,-14, 2,-14, 2, 1, 1,-14, 1, 0,}, /*U*/ {-14,-14,-14, 5, 5,-14, 2,-14, 2,-14, 2, 1, 1,-14, 1, 0,}, /*R*/ { 2,-14, 2,-14,-14, 2,-14, 1, 1, 1, 1, 1, 0, 1, 0, 0,}, /*Y*/ {-14, 2,-14, 2, 2,-14, 2, 1, 1, 1, 1, 0, 1, 0, 1, 0,}, /*M*/ { 2, 2,-14,-14,-14, 1, 1, 2, 1, 1,-14, 0, 1, 1, 0, 0,}, /*W*/ { 2,-14,-14, 2, 2, 1, 1, 1, 2,-14, 1, 1, 1, 0, 0, 0,}, /*S*/ {-14, 2, 2,-14,-14, 1, 1, 1,-14, 2, 1, 0, 0, 1, 1, 0,}, /*K*/ {-14,-14, 2, 2, 2, 1, 1,-14, 1, 1, 2, 1, 0, 0, 1, 0,}, /*D*/ { 1,-14, 1, 1, 1, 1, 0, 0, 1, 0, 1, 1, 0, 0, 0, 0,}, /*H*/ { 1, 1,-14, 1, 1, 0, 1, 1, 1, 0, 0, 0, 1, 0, 0, 0,}, /*V*/ { 1, 1, 1,-14,-14, 1, 0, 1, 0, 1, 0, 0, 0, 1, 0, 0,}, /*B*/ {-14, 1, 1, 1, 1, 0, 1, 0, 0, 1, 1, 0, 0, 0, 1, 0,}, /*N*/ { 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0,}, /* A C G T U R Y M W S K D H V B N */ }; #define GAPOPEN -17 #define GAPGROW -5 static int left_penalty[]={ GAPOPEN, GAPGROW, GAPOPEN, GAPOPEN }; static int top_penalty[]={ GAPOPEN, GAPOPEN, GAPOPEN, GAPGROW }; void splice_align_left(a, width, b, height, offset, good, right_end) char *a, *b; int width, height, offset, good, *right_end; { register left, top, direc, score, i, j; int max_score, max_i, max_j; *right_end=-1; if (width<2 || height<2) return; while (1) { /* keep trimming until no more vector found */ /* setting the upper-left-most cell */ Score(0,0)=max_score=match[*a][*b]; Direc(0,0)=NIL; max_i=max_j=0; /* setting the first row */ for (i=1; imax_score) { max_score=score; max_i=i; max_j=0; } } /* setting the first column */ for (j=1; jmax_score) { max_score=score; max_i=0; max_j=j; } } /* running dynamic programming for internal nodes */ for (j=1; j=0) { score+=match[a[i]][b[j]]; direc=DIA; } else { score=match[a[i]][b[j]]; direc=NIL; } top=Score(i,j-1)+top_penalty[Direc(i,j-1)]; left=Score(i-1,j)+left_penalty[Direc(i-1,j)]; if (top>left) { if (scoretop) { if (score=j*width) { direc=LFT; score=left; } else { direc=TOP; score=top; } } Direc(i,j)=direc; Score(i,j)=score; if (score>=max_score) { max_score=score; max_i=i; max_j=j; } } /* bracktrack to find the longest alignment path */ i=max_i; j=max_j; while (direc=Direc(i,j)) switch (direc) { case LFT: i--; break; case DIA: i--; j--; break; case TOP: j--; break; } /* check if done or continue chopping */ j=offset+max_i; left=max_i-i+1; if (leftmax_score) { max_score=score; max_i=i; max_j=0; } } /* setting the first column */ for (j=1; jmax_score) { max_score=score; max_i=0; max_j=j; } } /* running dynamic programming for internal nodes */ for (j=1; j=0) { score+=match[a[i]][b[j]]; direc=DIA; } else { score=match[a[i]][b[j]]; direc=NIL; } top=Score(i,j-1)+top_penalty[Direc(i,j-1)]; left=Score(i-1,j)+left_penalty[Direc(i-1,j)]; if (top>left) { if (scoretop) { if (score=j*width) { direc=LFT; score=left; } else { direc=TOP; score=top; } } Direc(i,j)=direc; Score(i,j)=score; if (score>=max_score) { max_score=score; max_i=i; max_j=j; } } /* bracktrack to find the longest alignment path */ i=max_i; j=max_j; while (direc=Direc(i,j)) switch (direc) { case LFT: i--; break; case DIA: i--; j--; break; case TOP: j--; break; } j=max_i-i+1; /* The length of a good hit must meet one of these 2 criteria: */ /* at least as long as the minimum good hit (span), and at least */ /* as long as the remaining target sequence that follows the hit; */ /* or longer than half the size of the splice sequence. */ if (j>=span && j>=width-max_i || j>height/2) *left_end=i+offset; } lucy-1.20p/lucy-s/vector.c0000640000245300000770000000632307770157072014663 0ustar mholmestigr/**************************************************************************** * * Copyright (c) 2003, The Institute for Genomic Research (TIGR), Rockville, * Maryland, U.S.A. All rights reserved. * ****************************************************************************/ #include #include extern void giveup(char *); static int Dlist[]={ 0, 2, 3}, Hlist[]={ 0, 1, 3}, rev_code[]={ 3, 2, 1, 0, 0, 6, 5, 10, 8, 9, 7, 12, 11, 14, 13, 15}; int tag_size; static int tag_len; static unsigned tag_mask; static unsigned *tag_well; int tag_code(c) int c; { register int tmp; switch (c) { case 0: tmp=0; break; case 1: tmp=1; break; case 2: tmp=2; break; case 3: case 4: tmp=3; break; case 5: tmp=random()%2 ? 2 : 0; break; case 6: tmp=random()%2 ? 3 : 1; break; case 7: tmp=random()%2 ; break; case 8: tmp=random()%2 ? 3 : 0; break; case 9: tmp=random()%2 ? 2 : 1; break; case 10: tmp=random()%2 ? 3 : 2; break; case 11: tmp=Dlist[random()%3]; break; case 12: tmp=Hlist[random()%3]; break; case 13: tmp=random()%3; break; case 14: tmp=random()%3+1; break; case 15: tmp=random()%4; break; default: giveup("how can other cases happen in tag_code?"); } return tmp; } void tag_sort(l, r) unsigned *l, *r; { register unsigned v, *i, *j, tmp; if (r>l) { v = *r; i = l-1; j = r; while (1) { while (*(++i) < v) ; while (j>l && *(--j) > v) ; if (i>=j) break; tmp = *i; *i = *j; *j = tmp; } tmp = *i; *i = *r; *r = tmp; tag_sort(l, i-1); tag_sort(i+1, r); } } void construct_vector_tags(seq, len) char *seq; int len; { register int i, j, k; register unsigned accf, accr; /* Note: this breaks the vector into non-overlapping tags of size tag_size */ tag_len=len/tag_size+(len%tag_size ? 1 : 0); tag_well=(unsigned*)malloc(sizeof(unsigned)*tag_len*2); if (tag_well==NULL) giveup("Memory allocation failure."); for (i=k=0; itag_well[m]) l=m+1; else { /* this tag matches a vector tag -- count all bases in the tag as matching, */ /* without double-counting any bases from the previous hit */ if (i-last_hit>=tag_size) hits+=tag_size; else hits+=i-last_hit; last_hit=i; break; } } } /* return the total number of matching bases */ return hits; } void destroy_vector_tags() { free(tag_well); }